Real - Q RV Detection Kit를 이용한 호흡기 감염을 유발하는 바이러스의 동정 성능 평가

호흡기바이러스 감염은 세계적으로 가장 흔한 감염성 질환이며 사망을 유발하는 주요 질환 중 하나로 신속하고 정확한 원인바이러스의 검출이 중요하다. 이번 연구에서 실시간 다중 PCR kit인Real Q RV Detection kit 의 호흡기 바이러스검출한계와 임상적 유용성을 평가하고자 하였다. 총 10주의 표준바이러스를 대상으로 하여 Real Q RV Detection kit의 검출 한계를 측정하였으며, Allplex Respiratory Panel Assay kit 와의 비교를 위해 123개의 비인후 도찰물, 객담 등의 호흡기검체를 대상으로 하여 제조사의 권고방법대로 검사하였다. 두 kit간 불일치 결과를 보이는 검체는 염기서열 분석을 시행하였다. 표준바이러스 중 Human rhinovirus 의 검출한계가 가장 낮았으며, Parainuenza virus 2 와 Parainuenza virus 3 는 상대적으로 높은 검출한계를 보였다. 두 kit 간 일치율은 95.9%에서 100%까지 나타났다. Real Q RV Detection kit에서 Adenovirus, Allplex Respiratory Panel kit에서 음성을 보인 검체는 염기서열분석 결과 모두 AdV가 확인되었고, Real Q RV Detection kit에서 HRV, Allplex Respiratory Panel kit에서 음성을 보인 검체는 염기서열분석 결과 HRV가 확인되었다. Real Q RV Detection kit에서 HRV로 양성, Allplex Respiratory Panel kit에서Human enterovirus 가 검출된 검체는 염기서열분석 결과 HRV가 확인되었다. Real Q RV Detection kit는 호흡기 바이러스의 검출에 있어서 유용할 것이다. 두 kit 간 불일치를 보인 검체 중 Real Q RV Detection kit에서AdV로 양성, Allplex Respiratory Panel kit에서 음성을 보인 검체는 염기서열분석 결과 모두 AdV가 확인되었고, Real Q RV Detection kit에서 HRV로 양성, Allplex Respiratory Panel kit에서 음성을 보인 검체는 염기서열분석 결과 HRV가 확인되었다. RealQ RV Detection kit에서 HRV로 양성, Allplex Respiratory Panel kit에서 HEV가 검출된 검체는 염기서열분석 결과 HRV가 확인되었다. Real Q RV Detection kit는 HRV에서 가장 낮은 검출한계를 보였으며 PIV 2, PIV 3에서 상대적으로 높은 검출한계를 보였는데, 기존의 연구에서 보고된 AvanSure RV real time PCR kit 에서도 HRV에서 낮은 검출한계를 보였고, PIV 2에서상대적으로 높은 검출한계를 보였다. Allplex Respiratory Panel Assay kit에서는 PIV 1에서 낮은 농도의 검출한계를 보였으며 PIV 4와 MPV에서 상대적으로 높은 검출한계를 보였다. Prodesse assays for respiratory viruses, FilmArray Respiratory Panel, Verigene RV+ test 에서는 바이러스 간 검출한계의 큰 차이는 보이지 않았다. xTAG Respiratory Viral Panel 에서는 FluB와MPV에서 낮은 검출한계를 보였으며, AdV에서 높은 검출한계를 보였다. 이와 같이 여러 다중 PCR kit 간 검출한계 값과 그 양상에차이를 보이는 이유는 제조사마다 사용하는 표적 유전자와 primer가 다름에 기인할 것으로 추정된다. Real Q RV Detection kit와 Allplex Respiratory Panel Assay kit의 비교에서 두 kit 간 약 96–100%로 높은 일치율을 보였지만, 그중 AdV와 HRV에 대해서는 각각 95.9%로 상대적으로 일치율이 낮았다. AdV의 경우 Real Q RV Detection kit에서만 양성을 보이고Allplex Respiratory Panel Assay kit에서는 음성을 보인 3건의 검체에서 모두 AdV의 염기서열을 확인할 수 있었다. HRV의 경우 5건에서 불일치를 보였는데, 이 중 3건은 Real Q RV Detection kit에서는음성 결과를 보였고, Allplex Respiratory Panel Assay kit에서만 양성 결과를 보였다. 1건은 Real Q RV Detection kit에서 양성, Allplex Respiratory Panel Assay kit에서 음성 결과를 보였고 1건은Real Q RV Detection kit에서 HRV, Allplex Respiratory Panel Assay kit에서 HEV 결과를 보였다. Real Q RV Detection kit에서만HRV가 검출된 검체 2건의 염기서열분석 결과 HRV가 확인되었다. 이전의 연구에서 HRV와 HEV의 5’ UTR이 유사하기 때문에 이에대해 시행한 PCR에서 교차반응이 있는 것으로 보고되었다. Real Q RV Detection kit에서 음성을 보이고 Allplex Respiratory Panel Assay kit에서만 양성을 보인 검체는 CoV, RSVA, FluA, PIV 2에서 각각 1건씩 있었으며, PIV 1은 2건 있었다. 이번 연구에서는Allplex Respiratory Panel Assay kit에서만 검출되고 Real Q RV Detection kit에서 음성 결과를 보인 검체는 염기서열분석을 시행하지 않았다는 제한점이 있다. Plasmid를 이용한 연구에 따르면 low copy 검체에서 불일치율이 더 높게 나타났는데, 사용된 호흡기 검체에서의 cycle threshold 값이 다양하였기 때문에 위와 같은 불일치 결과를 보인 것으로 설명할 수 있다. 이번 연구에서도 불일치 검체의 Ct 값의평균은 35, 양성 일치 검체의 Ct 값의 평균은 31로 나와 Ct 값이 높은 경우 불일치율이 높은 경향을 보였다. 이번 연구에서는 5배 단계 희석하여 검출된 바이러스 중 가장낮은 희석단계의 농도를 2회만 측정하여 검출한계를 추정하였으므로 충분한 평가가 이루어지지 않았다. 또한 HRV와 RSVB를 제외하고는 양성검체가 부족하여 두 kit 간 일치율을 충분히 반영할수 없는 제한점이 있었다. 저자들은 Real Q RV Detection kit의 검출한계를 추정하였고, 기존에 허가된 제품과 상응하는 결과를 보이는 것을 확인하였다. Real Q RV Detection kit가 호흡기 바이러스의 검출에 있어서 유용할 것으로 생각한다.