피브리노겐 정제 방법 document_id A220517004834

본 발명은 하나 이상의 오염 단백질이 양이온 교환제, 소수성 겔 및/또는 염료 겔을 사용하는 음성 크로마토그래피 및/또는 음흡착(negative adsorption)에 의해 고갈되는 하나 이상의 공정 단계를 포함하는, 피브리노겐의 정제 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 본 발명의 방법에 의해 수득되고 현저하게 안정성이 개선된 피브리노겐, 및 이 피브리노겐을 포함하는 약제학적 제제의 제조방법 및 용도에 관한 것이다. 피브리노겐은 혈액의 응고에 중요한 역할을 한다. 혈관은 외상 또는 수술의 경우에 거의 항상 손상되며, 출혈이 일어난다. 혈액의 응고는 혈액이 최소한의 상처 부위에서 고화되는 것을 유발하여, 출혈이 정지된다. 따라서, 응고 시스템은 다량의 혈액 손실로부터 신체를 보호한다. 혈액의 응고에 있어서, 혈장에 존재하는 가용성 피브리노겐은 트롬빈의 존재하에 섬유상 불용성 피브린으로 전환된다. 피브리노겐이 결핍된 경우, 혈액의 응고는 올바르게 작용하지 않는다. 예를 들어, 사람 혈장으로부터 분리된 피브리노겐을 투여하여 당해 결핍을 보충할 수 있다. 지혈 및 상처 치유에 대한 이의 중요성 때문에, 피브리노겐은 임상적 용도에 대단히 중요하다. 피브리노겐은 이와같이 임상적으로 대단히 중요하기 때문에, 문헌은 이러한 중요한 단백질을 정제하는 많은 방법과 관련된 다양한 참조 문헌을 포함한다. 피브리노겐은 주로 사람 혈장으로부터, 더욱 드물게는 또한 동물 혈장으로부터 정제된다. 마찬가지로 재조합성 피브리노겐을, 예를 들어, 재조합 발현 후에 세포 배양물로부터 또는 유전자전이 동물의 밀크로부터 정제할 수 있다. 사람 혈장은 100개 이상의 단백질과, 단백질 총량의 약 2%를 차지하는 피브리노겐의 복합 혼합물을 함유한다. 따라서, 피브리노겐의 정제 및 분리는 일반적으로 다수의 단계를 필요로 하며, 이러한 개별적 공정 단계를 위해 다양한 조합이 가능하다. 사람 혈장으로부터 피브리노겐 정제의 한가지 중요한 요소는 통상적으로 침전이다. 공지된 침전 방법은 글리신 또는 알라닌과 같은 아미노산[참조: EP 제0 383 234호, 국제 공개공보 WO 제01/48016호 또는 문헌: Jakobsen 0026# Kierulf, Thrombosis Research 3 (1973) 145-159], 황산암모늄[참조: 미국 특허 제5,773,033호, 미국 특허 제6,037,457호 또는 문헌: Takeda, Journal of Clinical Investigation 45 (1966) 103-111], 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 중합체[참조: 국제 공개공보 WO 제95/25748호 또는 문헌: Vila et al., Thrombosis Research 39 (1985) 651-656], 에탄올[참조: EP 제0 408 029호(여기서, 피브리노겐이 침전되고, 다른 혈장 단백질로부터 5 내지 10% 에탄올을 사용하여 분리된다) 또는 미국 특허 제5,090,003호 또는 문헌: Blomback 0026# Blomback, Arkiv For Kemi 10 (1956) 415-443], 황산화된 다당류(SPS, 예를 들어, 헤파린)[참조: 국제 공개공보 WO 제99/37680호 및 미국 특허 제4,210,580호] 및 낮은 이온 강도 용액[참조: 미국 특허 제4,188,318호 및 DE 제26 36 757호]을 사용한다. 그러나, 침전을 기본으로 하여 단독으로 수득된 피브리노겐의 순도는 특정한 적용에 아직 충분하지 않아 다양한 흡착 및 크로마토그래피 단계가 선행 기술에서 피브리노겐의 정제에 대해 추가로 또는 대안으로 기재되어 있다. 음이온 교환 크로마토그래피는 이온 교환 크로마토그래피 영역에서 빈번하게 사용된다. 이와 관련하여 EP 제0 555 135호를 참조할 수 있으며, 여기서 피브리노겐은 주요 공정 단계에서 음이온 교환 컬럼에 결합되는 반면, 예를 들어, 알부민 및 불활성화제는 결합되지 않는다. 피브리노겐은 계속해서 컬럼으로부터 용출된다. 국제 공개공보 WO 제93/05067호에서, 음이온 교환제에 대한 피브리노겐의 결합을 사용하여 바이러스 불활성화를 위해 첨가된 세정제를 다시 제거한다. 국제 공개공보 WO 제01/48016호에는 바람직하게는, 부하 및/또는 세척 완충제 중의 피브린 분해를 지연시키는 ω-아미노산(예: ε-아미노카프로산(EACA))을 사용하여 피브리노겐을 이온 교환 물질에 결합시키는 것이 기술되어 있다. 이러한 공정 단계에 의해 특히 오염 플라스미노겐을 피브리노겐-함유 용액으로부터 효율적으로 고갈시킬 수 있다. 양이온 교환 크로마토그래피는, 예를 들어, 국제 공개공보 WO 제00/17234호에 기술된 유전자전이 동물의 밀크로부터 피브리노겐을 정제하는 데 사용된다. 이러한 경우에 선택된 조건은 또한, 피브리노겐의 컬럼 물질로의 결합을 초래하고, 따라서, 예를 들어, 카제인을 제거할 수 있다. 양이온 교환제로의 피브리노겐 결합 특성은 국제 공개공보 WO 제91/01808호에서 사용되어 피브리노겐, 지질단백질 및 우레아를, 예를 들어, 혈액과 같은 체액으로부터 선택적으로 제거한다. 국제 공개공보 WO 제89/12065호에서, 피브리노겐은 헤파린-세파로스 컬럼에 의해 하나의 공정 단계로 정제된다. 피브리노겐이 컬럼 물질에 흡착되고, 특히, 알부민, 면역글로불린 및 바이러스-불활성화 물질이 제거될 수 있도록 조건을 선택한다. 소수성 상호작용에 의한 피브리노겐의 정제 가능성도 또한 기술되어 있다. 국제 공개공보 WO 제00/17239호에서, 피브리노겐은 염의 존재하에 소수성 컬럼에 결합시키고 후속적으로 용출시킴으로써 유전자전이 동물의 밀크로부터 하나의 공정 단계로 정제된다. 사람 혈장으로부터의 피브리노겐에 대해 소수성 컬럼의 사용 가능성이 마찬가지로 언급되어 있다. 피브리노겐과 선택적으로 결합할 수 있는 상이한 리간드를 갖는 다양한 친화성 크로마토그래피가 또한 기술되어 있다. 이와 관련하여, 예를 들어, 미국 특허 제6,037,457호 또는 국제 공개공보 WO 제99/05176호를 참조할 수 있으며, 여기에는 피브리노겐 또는 피브리노겐 펩타이드에 특이적으로 결합하여 특히 피브리노겐을 정제하는데 사용할 수 있는 항체가 기술되어 있다. EP 제0 789 030호, 미국 특허 제5,723,579호 및 미국 특허 제5,783,663호에는 피브리노겐과 결합하고 상응하게 피브리노겐을 정제시키기 위한 친화성 컬럼에서 리간드로서 사용될 수 있는 펩타이드가 기술되어 있다. 고정화된 리스토세틴이 마찬가지로 피브리노겐 결합용으로 사용되고 있으며, 후자는 8M 우레아를 사용하여 다시 용출된다[참조: Suzuki et al., Thrombosis Research 18(1980) 707-715]. 국제 공개공보 WO 제99/20655호에서, 최종적으로, 불활성화된 트롬빈이 트롬빈 기질(이는 피브리노겐을 포함한다)용 리간드로서 사용된다. 국제 공개공보 WO 제90/12803호에는 특정 단백질을 정제하기 위한 소위 IMAC(고정화된 금속 친화성 크로마토그래피)가 기술되어 있다. 사람 피브리노겐은 또한, 금속 킬레이트 매트릭스에 결합 가능한 단백질로서 언급되어 있다. 피브리노겐은 또한, 프로타민-아가로스에 결합되며, 계속해서 산성 pH에서 용출될 수 있다[참조: 미국 특허 제6,037,457호 또는 문헌: Dempfle 0026# Heene, Thrombosis Research 46(1987) 19-27]. 언급된 이러한 모든 공정 또는 공정 단계에서, 피브리노겐이 크로마토그래피 물질 또는 흡착 물질에 결합되고 계속해서 겔 물질로부터 다시 분리되도록 조건을 선택하는 것이 일반적이다. 피브리노겐이 컬럼을 통과하는 공정은 지금까지, 출발 물질을 각종 "유용한 분획"으로 분획시키는 것을 목적으로 하거나 피브리노겐이 불순물인 공정에 대해서만 기술되어 있다. 혈장 또는 동결침전물은 피브리노겐 이외에 또한, 다량의 다른 임상적으로 중요한 혈장 단백질을 함유하여, VIII(F VIII) 인자, 피브로넥틴 및 폰 빌레브란트(von Willebrand) 인자의 분획 및 분리용 출발 물질로서 사용하게 된다. 이러한 이유로, 주요 단백질 4가지 모두 또는 이들 중의 둘 이상을 분리할 수 있는 크로마토그래피 공정 단계가 또한 사용된다. 이러한 목적으로, 음이온 교환제는 피브리노겐을 결합시키지 않지만, 예를 들어, F VIII, 폰 빌레브란트 인자 및 피브로넥틴은 결합시키는 조건하에 사용되며, 이들은 계속해서 상이한 이온 강도로 선택적으로 용출된다. 이와 관련하여, 예를 들어, 국제 공개공보 WO 제89/12065호, EP 제0 359 593호 또는 미국 특허 제5,252,709호를 참조할 수 있다. 음이온 교환제에 대해 EP 제0 383 234호에서 선택된 조건은 F VIII만 결합시키는 반면, 폰 빌레브란트 인자, 피브로넥틴 및 피브리노겐은 컬럼을 통과시키거나 상등액에 잔류하도록(배치식) 하는 것이다. EP 제0 408 029호 및 미국 특허 제5,138,034호는 최종적으로 특히, 처음에 F VIII 및 피브로넥틴이 동결/해동 처리를 통한 침전에 의해 제거되고, IX 인자(F IX)가 후속 음이온 교환제 컬럼에 흡착되고, 피브리노겐이 에탄올을 사용하는 컬럼의 통류액(flow-through)으로부터 침전되는 분획화 공정을 포함한다. 이러한 경우에 모두 목적은 임상적으로 중요한 주요 단백질을 분리시키는 것이며, 이는 다음에 약제학적으로 사용하기 전에 추가 정제 단계에 일회 적용할 수 있다. 음이온 교환제 컬럼을 사용하는 유사한 공정 단계가 또한, 피브리노겐의 정제에서 가능한 중간 단계로서 사용되어 EP 제0 555 135호에서 F VIII을 제거한다. 국제 공개공보 WO 제96/02571호 또는 미국 특허 제5,834,420호에서의 한 양태에서, 국제 공개공보 WO 제89/12065호와 유사한 이온 교환제 물질을 사용하여 F VIII 및 폰 빌레브란트 인자를 제거하여 피브리노겐을 정제시킨다. 그러나, 단백질(예: F VIII 및 폰 빌레브란트 인자)은 피브리노겐의 안정성에 영향을 주지 않는다. 이러한 공정 단계는 또한 빈번하게 F VIII 농축물을 제조하는 데에 사용되어 오염물질(예: 면역글로불린, 피브로넥틴 및 피브리노겐)로부터 가능한 한 완전하게 이들을 유리시킨다. 이와 관련하여, 예를 들어, 미국 특허 제5,043,428호 및 EP 제0 173 242호를 참조할 수 있다. 미국 특허 제4,210,580호에는 피브리노겐을 헤파린 침전 후에 후속 음이온 교환제 컬럼을 세척함으로써 제거할 수 있는, 피브로넥틴의 정제 방법이 기술되어 있다. 미국 특허 제5,099,003호에서는 또한 음이온 교환제를 사용하지만, 이러한 경우에 II, VII, IX 및 X 인자를 제거하며, 이들은 β-프로피올락톤을 사용하는 바이러스-불활성화 처리 및 자외선 조사 후에 피브리노겐-함유 용액의 겔화 및 클러밍(cluming)을 달리 유발한다. 피브리노겐, 프로트롬빈 복합체, 항트롬빈 III 및 저장-안정성 혈청 단백질 용액을 제조하는 방법이 기술되어 있는 DE 제29 02 158호에는, 처음에 프로트롬빈 복합체(F II, F VII, F IX 및 F X)가 음이온 교환제 상에 흡착됨에 의해 수득되며, 계속해서 피브리노겐이 또한 콜로이드성 실리카를 사용하는 흡착으로 통류액으로부터 분리되는 변형체가 기술되어 있다. 그러나, 섬유소용해가 이러한 정제 순서 동안에 빈번하게 일어나고 피브리노겐의 분리에 악영향을 미치므로, 바람직한 변형태는 먼저 실리카에 흡착시켜 피브리노겐을 제거하고, 계속해서 음이온 교환제를 사용하여 프로트롬빈 복합체를 분리시키는 것이다. 따라서, 이러한 경우에 음이온 교환제의 사용은 통류액으로부터 동시에 분리되는 피브리노겐의 품질에 불리한 효과를 주는 경향이 있다. 최종적으로, 국제 공개공보 WO 제99/51724호에는 유전자전이 동물의 밀크로부터, 피브리노겐을 포함하여 이종성 단백질을 정제하기 위한 "음성(negative)" 크로마토그래피 방법이 기술되어 있다. 그러나, 이러한 경우에, 하이드록시아파타이트가 겔 물질로서 사용되어 오염 밀크 단백질과 결합한다. 또한, 예를 들어, 특이적 결합을 통해 피브로넥틴을 고갈시킬 수 있는 고정화된 젤라틴과 같은 특이적 음성 친화성 크로마토그래피가 기술되어 있다[참조: Vuento 0026# Vaheri, Biochem. J. (1979) 183, 331-337]. 그러나, 피브로넥틴은 피브리노겐의 안정성에 영향을 주지 않는 구조 단백질이다. 플라스미노겐과 매우 특이적으로 결합하는 리신 또는 유사체 화합물의 능력 및 L-리신-치환된 세파로스를 사용하는 친화성 크로마토그래피를 통해 플라스미노겐을 정제하는 이의 능력의 사용 가능성이 또한 기술되어 있다[참조: Deutsch 0026# Mertz, Science 170(1970) 1095-1096; Matsuda et al., Thrombosis Research 1(1972) 619-630]. 이러한 리신 리간드의 능력은 공정 단계로서 일부 피브리노겐 정제 방법에 사용되어 오염 플라스미노겐을 고갈시킨다. 이와 관련하여, 예를 들어, 국제 공개공보 WO 제95/25748호 또는 국제 공개공보 WO 제93/05067호를 참조할 수 있다. 그러나, 이러한 경우에 유일한 단백질, 플라스미노겐이 매우 특이적으로 고갈되는데, 이는 리신이 플라스미노겐의 특정 에피토프(크링 도메인)에 매우 특이적으로 결합하기 때문이다. 국제 공개공보 WO 제01/27623호에는 이소아글루티닌(혈액 항체)가 혈액 또는, 예를 들어, 피브리노겐과 같은 혈액 구성 성분으로부터 제거되도록 하는 방법이 기술되어 있다. 이러한 경우에, 항원(예: 올리고당)이 친화성 컬럼에서 이소아글루티닌에 특이적으로 결합될 수 있는 리간드로서 사용된다. 이소아글루티닌의 제거는 공여된 혈액 또는 공여된 혈액 성분의 혈액형이 수령자의 혈액형과 상이한 경우, 합병증을 방지하는 데에 유리하다. 동종응집소는 단백질 분해에 대한 피브리노겐의 안정성에 영향을 주지 않는다. 예를 들어, 혈장, 동결침전물, 응집 인자 및 피브리노겐과 같은 생물학적 물질로부터 지용성 공정 화학물질을 제거하는 방법을 기술하고 있는 EP 제0 366 946호 및 미국 특허 제5,094,960호가 또한 사용된다. 이러한 경우에, 선택된 조건하에 공정 화학물질은 흡착하지만 생물학적 물질의 단백질은 흡착하지 않는 소수성 크로마토그래피 컬럼이 사용된다. 이러한 공정의 목적은 첨가되어, 예를 들어, 바이러스를 불활성화시키는 화학물질을 제거하는 것일 뿐이다. 예를 들어, 특히 피브리노겐-분해 인자(예: XI 인자(F XI))[참조: Scott et al., Arch Biochem Biophys 249(1986) 480-488]를 포함하는 응집 인자와 같은 단백질은 선택된 조건하에 결합시키려는 것이 아니며 이 특허 문헌에서 고갈시키려는 것이 아니다. 유사하게, DE 제29 03 131호에서의 목적은 이온 교환 물질의 사용을 통해 이온을 교환시키는 것일 뿐이다. 이 특허 문헌에는 4가지 생성물(항혈우병성 글로불린 A, 프로트롬빈 복합체, 저장-안정성 혈청 단백질 용액 및 피브리노겐)의 동시 정제 방법이 기술되어 있으며, 이러한 경우에 칼슘 이온이 제거되고, 시트레이트화 혈장의 사용시에 추가로 시트레이트 이온이 제거되는 혈장이 출발 물질로서 필요하다. 이러한 경우에, 양이온 교환제는 칼슘 이온을 나트륨 또는 수소 이온으로 대체시키고, 음이온 교환제는 시트레이트 이온을 클로라이드 또는 하이드록사이드 이온으로 대체시킨다. 다음에, 이러한 방식으로 수득된 이온 교환제 혈장으로부터 특히 피브리노겐을 실리카로의 흡착에 의해 분리시킬 수 있다. 그러나, 이러한 경우에 사용된 양이온 교환제는 칼슘 이온을 대체시켜 응집 반응의 개시를 방지하는 작용만 하고, 정제는 이러한 단계에 의해 일어나지 않는다. 흡착이 마찬가지로 혈장 단백질을 정제하는 데 사용된다. 따라서, DE 제29 03 131호에서는 인산삼칼슘(TCP) 흡착을 사용하여 프로트롬빈 복합체를 정제하였다. 국제 공개공보 WO 제95/25748호에서는 이를 사용하여 피브리노겐을 정제하기 위한 하나의 공정 단계로서 트로트롬빈 복합체를 제거한다. 또한, 수산화알루미늄(Al(OH)3)을 사용하는 흡착이 언급되어야 하고, 이는 프로트롬빈 복합체의 인자에 결합되고, 예를 들어, 지질의 제거에서 중요한 역할을 할 수 있다. Al(OH)3은, 예를 들어, EP 제0 383 234호 또는 국제 공개공보 WO 제01/48016호에서 사용된다. 또한, 이와 관련하여 황산바륨(BaSO4)을 사용할 수 있음이 언급되어야 한다. EP 제0 366 946호 또는 미국 특허 제5,094,960호(여기서, 공정 화학물질만 제거된다) 및 DE 제29 03 131호(여기서, 칼슘 및 시트레이트 이온만 제거된다)를 제외한, 음성 크로마토그래피/음흡착에 대해 기술된 모든 방법에, 본 발명의 공정 단계(들)에 대해 기술된 것과 다른 겔 물질을 사용하는 것이 일반적이다. 본 발명의 공정 단계의 특정한 이점은 하나 이상의 오염 단백질, 특히 피브리노겐-분해 단백질 또는 이의 전구체의 효율적 고갈에 의해 용액 중의 안정성이 상당히 증가된 피브리노겐 제제를 수득할 수 있다는 것이 추가 포인트이다. 공업적으로 분리하기 위해서 공업적 관점에서 경제적으로 수행할 수 있을 뿐만 아니라 용액 중에 장기간 저장시에 매우 실질적으로 안정한 채로 남아 있는 피브리노겐을 유도하는 정제 방법을 개발하는 것이 특히 중요하다. 피브리노겐은 복잡한 구조를 갖는 매우 큰 단백질이다. 이는 두개의 대칭 반쪽으로 이루어진 약 340kDa의 당단백질이다. 알파(Aα), 베타(Bβ) 및 감마(γ) 쇄의 짝은 연신된 분자 구조를 형성하며(약 47nm), 이는 3개의 영역(중앙의 E 영역 및 두개의 동일한 D 영역)을 형성한다. 이러한 복합한 구조는 안정한 피브린 매트릭스의 효율적 형성에 필수적이다. 알파 쇄는 특히 피브리노겐 분해 프로테아제에 의한 초기 단백질 분해에 의해 영향을 받는다. 알파 쇄에 대한 이러한 유형의 손상은, 트롬빈의 작용 후에, 지연된 응집 출발을 초래하며, 알파 쇄(들)의 단백질 분해는 피브린 중합에 영향을 줄 수 있음을 암시한다. 피브린 응괴의 삼차원 구조는 또한 손상된 알파 쇄에 의해 영향을 받는다. 피브린 망은 미세하며 더욱 얇은 원섬유 및 낮은 기계적 안정성을 갖는다. 알파 쇄의 C-종결 말단은 활성화 F XIII에 의해 촉매화된, 인접한 피브린 분자 사이의 결합을 기본으로 하는 아미노산 서열을 포함한다. 가교결합 고갈은 피브린 매트릭스의 안정성을 감소시킨다. 이는 모두 심각하게 손상된 알파 쇄를 갖는 피브리노겐이 품질을 감소시키고, 예를 들어, 피브린 아교에서 약제학적으로 사용하기에 바람직하지 않음을 나타낸다. 상당하는 언급이 또한, 다른 피브리노겐 쇄의 단백질 분해에 적용되지만, 이는 일반적으로 더욱 느린 역학으로 일어난다. 본 발명의 공정 단계의 이점은 피브리노겐-분해 단백질의 고갈이며, 이의 결과, 수용액 중의 피브리노겐의 안정성이 증가된다. 따라서, 피브리노겐-분해 단백질 및 이의 전구효소의 제거를 최대화하는 방법이 특히 유리한데, 그 이유는 수득된 피브리노겐 용액의 안정성 및 효능이 액체 형태로 장기간 저장시에도 결정적으로 개선되기 때문이다. 액체 형태로 저장이 피브리노겐에 특히 유리한데, 그 이유는 환자에게 활성 물질의 즉시 사용이 가능하고, 따라서 동결건조된 제제의 복원 또는 동결된 제제의 해동 및 가온에 더욱 많은 시간이 소모되기 때문이다. 그러나, 동결건조물 또는 동결된 상태로 저장되는 경우에도, 복원되거나 해동된 피브리노겐이 장기간 안정한 것이 유리하다. 이는, 예를 들어, 물질이, 예를 들어, 수술하기 위해 예방책으로서 복원된 상황에서 명백하지만, 사용은 다음에 의학적 고려를 근거로 하여 필수적이지 않다. 이 물질은, 안정성이 단기간에 불과하고 나중에 더 이상 사용할 수 없는 경우, 폐기해야 한다. 피브린 아교의 사용시에 피브리노겐이 액체 형태인 것이 특히 유리하다. 시판되는 아교는 대부분 두가지 성분을 포함한다. 한가지 성분은 피브리노겐을, 빈번하게 XIII 인자 및 섬유소용해 억제제(예: 아프로티닌)와 함께 포함하며, 다른 성분은 트롬빈을, 빈번하게 칼슘 이온과 함께 포함한다. 즉시 사용가능한 아교를 제조하기 위한 복원은 비교적 장시간을 필요로 하는데, 이는 특히 피브리노겐이 고 농도로 존재하기 때문이다. 본 발명의 방법에 의해 분리되는 피브리노겐의 다른 큰 이점은 실온에서도 특정 시간 동안 액체로서 저장 가능하고, 따라서, 예를 들어, 응급 상황에서 사용 특성을 개선시킬 수 있다는 것이다. 또한, 이는 긴 수송 경로에 유리하며, 여기서, 적합하다면, 안정성이 이 기간 동안에 실온에서 보장될 수 있는 경우, 저온이 전체에 걸쳐 보장되지 않을 수 있다. 따라서, 용액 중의 피브리노겐의 저장 안정성은 많은 측면에서 제조, 사용, 수송 및 환자에게 투여를 용이하게 한다. 본 발명의 방법에 의해 제조된 피브리노겐의 유리하게 증가된 안정성에 기인하여, 추가로 많은 약제학적 제제에서, 특정 환경에서, 원하지 않는 부작용을 유도할 수 있거나 잠재적 위험을 방지하기 위해 피해야 하는 섬유소용해 또는 피브리노겐융해 억제제를 첨가할 필요가 없도록 할 수 있다. 따라서, 요약하면, 기술된 많은 정제 방법에도 불구하고, 공업적 규모로 가능한 안정한 피브리노겐 용액을 경제적으로 제조할 수 있는 개선된 방법이 계속 필요하다.