비포식 세포로의 침투가 약화된 리스테리아, 리스테리아를 포함하는 백신, 및 그것의 사용방법 document_id A220623012232

미생물은 이종 항원을 송달하는 백신으로서 사용하도록 개발되어 왔다. 이종 항원 송달은 상이한 종에서 유래하는 단백질 또는 항원을 코딩하는 핵산 서열을 포함하도록 변형되어진 미생물에 의해서 제공된다. 이종 항원 송달은 특히 암 및 병원성 약제(예를 들어, HIV 또는 B형 간염)와 같은 독성 또는 치사성 공급원에서 기인한 질병 또는 상태를 치료하거나 예방하는데 특히 유리하다. 천연 또는 독성 감염제의 주입은 수용 유기체에 매우 유독하다. 마찬가지로, 감염된 개체에서 돌발적으로 발생하는 암 세포가 연속적으로 증식할 수 있고 또한 수용 유기체에 매우 유독하다. 이종 항원 송달은 또한 약독 또는 사멸 약제 또는 세포의 투여가 유효한 면역 반응을 유발하는데 성공적이지 않은 것으로 증명된 경우 또는 감염성 약제 또는 암 세포의 충분한 감약이 허용가능한 확실성으로 보장되지 않는 경우에 또한 특히 유용하다. 최근에, 어떤 박테리아 균주가 재조합 백신으로서 개발되었다. 예를 들어, 플라스모듐 베르게이 설컴스포로지트(Plasmodium berghei circumsporozite) 항원을 발현하도록 변형된 약독 살모넬라(Salmonella)의 구강용 백신은 말라리아로부터 마우스를 보호하는 것으로 밝혀졌다(Aggarwal 등, 1990.J.Exp.Med. 172:1083). 이종 백신으로 가능하게 사용될 수 있는 한 부류의 박테리아는 조건성 세포내 박테리아이다. 이들 박테리아에 대한 면역 반응은 체액 반응, 세포-매개 반응, 또는 둘다일 수 있다. 그러나, 사멸 세포내 박테리아 또는 세포내 박테리아의 성분은 전체세포-매개 면역 반응을 유도하지 않을 수 있다(Lauvau 등 2001. Science 294:1735-9). 이들 박테리아는 그들의 숙주의 순환계 또는 림프계와는 독립적인 그들의 생명 주기의 일부분을 보낼 수 있으며, 숙주 면역계의 본래의, 항체(즉, 체액) 반응에 놓여질 수 있다. 조건성 세포내 박테리아는 또한 숙주 세포내에서 분리된 그들의 생명 주기의 일부분을 보낼 수 있으며, 박테리아는 숙주 면역계의 본래의, 체액으로부터 보호될 수도 있고 숙주 면역계의 세포 매개 반응에 놓여질 수도 있다. 세포 매개 면역 반응은 에펙터 T 림프구를 자극하는 면역반응이고, 이것은 차례로 메모리(에펙터 또는 중심) T 세포가 될 수 있다. 세포 매개 면역 반응은 숙주 세포의 표면상에 항원을 제시하는 것에 의해 개시된다. 숙주 면역계의 포식세포는 생존 박테리아, 사멸 박테리아 또는 박테리아 성분을 리소좀내로 탐식할 수 있으며, 리소좀은 포식리소좀으로 성숙하여 단백질 항원을 펩티드로 분해시킨다. 포식세포의 포식리소좀에 함유된 항원 펩티드는 CD4+T 세포가 인식하는 MHC 클래스 II 분자에 의해 이들 포식 세포의 표면에 제시되고 T세포 반응을 활성화할 수 있다. 포유동물체중의 어떤 세포의 세포질에 발현된 항원 펩티드는 CD8+ T 세포가 인식하는 MHC 클래스 I 분자에 의해서 세포 표면에 제시되고 세포독성 T 세포(CTL) 반응을 활성화할 수 있다. 그러나, 사멸 세포내 박테리아 또는 세포내 박테리아의 성분은 비포식 세포에 침투하지 않거나 포식세포의 포식리소좀으로부터 세포질로 이탈하지 않을 수 있으므로 결과적으로 예를 들어, 대식세포 및 수지상 세포와 같은 포식세포의 활성화 및 성숙을 일으킨다. 따라서, 사멸 세포내 박테리아의 항원 또는 세포내 박테리아의 성분은 MHC I 제시 유발에는 이용가능하지 않으며 CTL 반응을 활성화시키지 않는다. 충분히 효과적인 세포-매개 면역 반응을 유발하기 위해서는 숙주의 포식리소좀 및/또는 세포질내에서 단백질을 생산하는 세포내 박테리아의 능력이 필요하다. 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes) 균주는 암(U.S. 특허번호 6,051,237 Paterson; U.S. 특허 번호 6,565,852) 및 HIV(US 특허 번호 5,830,702, Partnoy0026#Paterson)과 같은 질환 유발 약제의 주입을 허용하지 않는 임상 조건에 대해 면역 반응을 유발하는 면역 시스템에 항원 송달을 제공하는 이종 단백질의 세포내 송달 비히클로서 개발되어 왔다. 조건 세포내 박테리아로서, 리스테리아 모노사이토제네스(L.monocytogenes)는 체액 및 세포 매개 박테리아 항원 특이적 면역 반응을 유발한다. 리스테리아(Listeria)가 숙주 유기체 세포로 침투된 다음, 리스테리아(Listeria)는 탐식 숙주 세포의 포식리소좀으로부터 세포의 세포질로 이탈시킬 수 있는 리스테리아(Listeria) 특이적 단백질을 생산한다. 세포에서, 리스테리아 모노사이토제네스(L.monocytogenes)는 생존에 필요한 발현 단백질, 및 리스테리아(Listeria) 프로모터에 작동가능하게 연결된 발현 이종 유전자를 증식시킨다. MHC 단백질에 의한 탐식 세포의 표면상에 이들 이종 단백질의 펩티드 제시는 T 세포 반응의 발생을 허용한다. 리스테리아 모노사이토제네스(L.monocytogenes)는 그람-양성, 면역손상 개체 및 임신한 여성에서 심각한 감염을 일으키는 음식물에 함유된 사람 및 동물 병원균이기 때문에, 백신에 대한 면역원성은 유지하면서, 숙주에 대한 독성을 감소시키는 방식으로 이들 박테리아의 균주를 약화시켜야만 한다. 독성은 간, 비장 및 중추신경계통의 기관 및 조직과 같은, 숙주의 다양한 기관 및 조직으로의 박테리아 침투의 결과이다. 선택된 감염성 및 악성 질환과 관련된 이종 코드화 항원에 특이적인 적응성 세포 매개 면역을 유발하는 그것의 효능에 영향을 미치지 않으면서, 백신으로서 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)를 사용하는 것과 관련된 위험을 감소시키는 것이 유리할 것이다. (발명의 개요) 본 발명은 일반적으로 약독 리스테리아(Listeria), 및 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes))뿐만 아니라, 특히 백신에서 이들 리스테리아(Listeria) 를 사용하는 방법을 제공한다. 백신은 면역 반응 유발 및 암을 포함하는 다양한 질병의 치료 및/또는 예방에 유용하다. 한 양태에서, 본 발명은 (예를 들어, 인터날린 B 와 같은 인터날린이 결여된) 비-포식 세포로의 침투가 약화되어 있고, 비-리스테리아(Listeria) 약제를 코딩하는 핵산 분자를 포함하는, 분리된 리스테리아(Listeria) 박테리아를 제공한다. 어떤 구체예에서, 박테리아는 (예를 들어, ActA 가 결여되어 있는) 세포와 세포 사이 확산에 대해서 더 약화되어 있다. 어떤 구체예에서, 약독 리스테리아(Listeria) 박테리아는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주이다. 어떤 구체예에서, 리스테리아(Listeria) 박테리아는 항체 또는 항체 단편을 박테리아에 결합시킴으로써 약화되었다. 리스테리아(Listeria) 박테리아를 포함하는 면역원성 조성물이 또한 제공되며, 박테리아 및 약학적으로 허용가능한 담체 양자 및/또는 아쥬반트를 포함하는 백신이 또한 제공된다. 더욱이, 약독 리스테리아(Listeria) 박테리아를 포함하는 조성물의 유효량을 숙주에 투여하는 단계를 포함하는, 숙주에서 비-리스테리아(Listeria) 항원에 대한 면역반응을 유발하는 방법 및 약독 리스테리아(Listeria) 박테리아를 포함하는 조성물의 유효량을 숙주에 투여하는 단계를 포함하는 숙주에서 (암 또는 감염성 질환과 같은) 질환을 예방 또는 치료하는 방법이 또한 제공된다. 약독 리스테리아(Listeria) 박테리아를 포함하는 전문 항원 제시 세포가 또한 제공된다. 다른 양태에서, 본 발명은 (인터날린 B와 같은 인터날린이 결여되어 있는) 비포식 세포로의 침투 및 (ActA 가 결여되어 있는) 세포와 세포 사이 확산 모두가 약화되어 있는 분리된 리스테리아(Listeria) 박테리아를 제공한다. 어떤 구체예에서, 약독 리스테리아(Listeria) 박테리아는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주이다. 어떤 구체예에서, 리스테리아(Listeria) 박테리아의 핵산은 박테리아가 세포와 세포 사이 확산이 약화되도록 핵산 표적화 화합물로 변형되어 있다. 어떤 구체예에서, 약독 리스테리아(Listeria) 박테리아는 inlB 및 actA 유전자 모두에서 적어도 하나의 돌연변이(예컨대, 결실 돌연변이)를 포함한다. 어떤 구체예에서, 약독 리스테리아(Listeria)는 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(ATCC)에 기탁되고 수탁번호 PTA-5562로 표시되는 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)) △actA△inlB 균주(또는 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes))actA-inlB- 균주로 지칭됨)이거나, 인터날린 B 및 ActA 모두가 결여되어 있는 기탁 균주의 돌연변이이다. 어떤 구체예에서, 약독 리스테리아(Listeria) 박테리아는 비-리스테리아(Listeria) 항원을 코딩하는 핵산 분자를 포함한다. 어떤 구체예에서, 약독 리스테리아(Listeria) 박테리아는 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)) 종에 속한다. 약독 리스테리아(Listeria)를 포함하는 면역원성 조성물이 또한 제공되며, 약독 리스테리아(Listeria) 및 약학적으로 허용가능한 담체 및/또는 아쥬반트를 포함하는 백신이 또한 제공된다. 더욱이, 약독 리스테리아(Listeria) 박테리아를 포함하는 조성물의 유효량을 숙주에 투여하는 단계를 포함하는, 숙주에서 비-리스테리아(Listeria) 항원에 대한 면역반응을 유발하는 방법이 제공된다. 약독 리스테리아(Listeria) 박테리아를 포함하는 조성물의 유효량을 숙주에 투여하는 단계를 포함하는, 숙주에서 (암, Listeriosis, 또는 비-리스테리아(Listeria) 병원균에 의해서 유발된 질환과 같은) 질환을 예방 또는 치료하는 방법이 또한 제공된다. 약독 리스테리아(Listeria) 박테리아를 포함하는 전문 항원 제시 세포가 더 제공된다. 더이상의 양태에서, 본 발명은 (a) 비-포식 세포로의 침투가 약화된 리스테리아(Listeria) 박테리아, 및 (b) 약학적으로 허용가능한 담체 및/또는 아쥬반트를 포함하는 백신을 제공한다. 어떤 구체예에서, 약독 리스테리아(Listeria) 박테리아는 인터날린 B가 결여되어 있다. 어떤 구체예에서, 백신중의 약독 리스테리아(Listeria) 박테리아는 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)) 종에 속한다. 어떤 구체예에서, 약독 리스테리아(Listeria) 박테리아는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주이다. 숙주에 백신의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 숙주에서 비-리스테리아(Listeria) 항원에 대해 면역 반응을 유발하는 방법이 제공된다. 숙주에 백신의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 숙주에서 질병을 예방하거나 치료하는 방법이 또한 제공한다. 더이상의 양태에서, 본 발명은 (예를 들어, 인터날린 B와 같은 인터날린이 결여되어 있는) 비-포식성 세포로의 침투가 약화된 리스테리아(Listeria) 박테리아를 포함하는 분리된 전문 항원 제시 세포를 제공한다. 어떤 구체예에서, 박테리아는 (예를 들어, ActA 가 결여되어 있는) 세포와 세포 사이 확산이 더 약화되어 있다. 어떤 구체예에서, 전문 항원-제시 세포중의 약화된 리스테리아(Listeria) 박테리아는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주이다. 어떤 구체예에서, 리스테리아(Listeria) 박테리아는 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes) 종에 속한다. 본 발명은 또한 전문 항원-제시 세포의 유효량을 숙주에 투여하는 단계를 포함하는, 숙주에서 항원에 대한 면역반응을 유발하는 방법을 제공하며, 약화된 리스테리아(Listeria) 박테리아는 항원을 코딩하는 핵산을 포함한다. 다른 양태에서, 본 발명은 전문 항원 제시 세포의 유효량을 숙주에 투여하는 단계를 포함하는, 숙주에서 질병을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다. 다른 양태에서, 본 발명은 약독 리스테리아(Listeria) 박테리아를 항원 제시 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는, (체내 또는 체외에서) 항원 제시 세포상에 MHC 클래스 I 항원 제시 또는, MHC 클래스 II 항원 제시를 유발하는 방법을 제공하며, 여기서 약독 리스테리아(Listeria) 박테리아는 비포식 세포로의 침투가 약화되어 있으며 MHC 클래스 I 에피토프 또는 MHC 클래스 II 에피토프를 포함하는 비-리스테리아(Listeria) 항원을 코딩하는 핵산 분자를 포함한다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 (a) 비포식 세포로의 침투가 약화되어 있으며, 항원을 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 약독 리스테리아(Listeria) 박테리아를 항원-제시 세포(예를 들어, 숙주로부터의 항원 제시 세포)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 항원-제시 세포를 숙주에 투여하는 단계를 포함하는 숙주에서 항원에 대한 면역 반응을 유발하는 방법을 제공한다. 다른 양태에서, 본 발명은 비돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주에 비하여 비포식 세포로의 침투가 약화되어 있으나, 포식 세포로의 침투능을 보유하고 있는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주를 포함하는 백신을 숙주에 투여하는 단계를 포함하는, 숙주에서 (암과 같은) 질병을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다. 다른 양태에서, 본 발명은 비돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주에 비하여 비포식 세포로의 침투가 약화되어 있으나, 포식 세포로의 침투능은 보유하고 있으며, 항원을 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주를 포함하는 조성물의 유효량을 숙주에 투여하는 단계를 포함하는, 숙주에서 항원에 대한 면역 반응을 유발하는 방법을 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 비돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주에 비하여 비포식 세포로의 침투가 약화되어 있으나, 포식 세포로의 침투능은 보유하고 있으며, MHC 클래스 I 에피토프 또는 MHC 클래스 II 에피토프 각각을 포함하는 항원을 코딩하는 이종 핵산 분자를 포함하는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주를 항원-제시 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는 MHC 클래스 I 항원 제시 또는 MHC 클래스 II 항원 제시를 유발하는 방법을 제공한다. 다른 양태에서, 본 발명은 (a) 비돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주에 비하여 비포식 세포로의 침투가 약화되어 있으나, 포식 세포로의 침투능은 보유하고 있으며, 항원을 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주를, 적당한 조건과 항원 제시 세포를 로딩하기에 충분한 시간동안 숙주 유래의 항원-제시 세포와 접촉시키는 단계; 및 (b) 숙주에 항원 제시 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 숙주에서 항원에 대한 면역 반응을 유발하는 방법을 제공한다. 다른 구체예에서, 항원은 종양-연관 항원이거나 또는, 종양-연관 항원으로부터 유래된다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 균주가 비포식 세포로 침투하는 능력은 감소되지만, 균주가 포식 세포에 침투하는 능력은 실질적으로 보유하도록 균주를 변형하는 단계를 포함하는, 백신에 사용된 리스테리아(Listeria) 균주의 병원성을 감소시키는 방법을 제공한다. 이들 방법은 특정 비포식 세포에 대한 박테리아의 지향성(침투)을 유도하는 단백질을 코딩하는 유전자중에 결실 돌연변이를 포함할 수 있거나 또는, 상기 침투를 은폐하여 결과적으로 비포식 세포의 감염을 저해하는, 다클론 또는 단일클론 항체를 이용한 박테리아의 치료를 포함할 수 있다. 더 이상의 양태에서, 본 발명은 비돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주에 비하여 비포식 세포로의 침투는 약화되어 있지만, 실질적으로 포식 세포로 침투할 수 있는 능력은 보유하고 있는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주를 포함하는 조성물을 숙주에 투여하는 단계를 포함하는, 숙주에서 (비포식 세포에 대비되는) 포식 세포로 단백질을 선택적으로 송달하는 방법을 제공하며, 단백질을 발현하는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주의 게놈은 인터날린과 같은 인바신(또는 "침투 단백질"로 지칭됨)을 코딩하는 적어도 하나의 유전자중에 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 다른 양태에서, 발명은 백신을 제조하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 발명은 비돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주에 비하여 비포식 세포로의 침투는 약화되어 있지만, 실질적으로 포식 세포로 침투할 수 있는 능력은 보유하고 있으며, 항원을 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주를, 적당한 조건하에서 항원 제시 세포를 로딩하기에 충분한 시간동안, 시험관내에서 또는 체외에서 항원 제시 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는, 백신을 제조하는 방법을 제공한다. 전술한 양태 각각의 어떤 구체예에서, 리스테리아(Listeria) 의 돌연변이 균주는 인터날린 B가 결여되어 있는 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)의 돌연변이 균주이고/또는 인터날린 B(inlB)를 코딩하는 유전자중에 및/또는 그것의 발현을 조절하는 요소중에 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 전술한 양태 각각의 더이상의 구체예에서, 돌연변이 균주는 인터날린 B 및 actA 모두가 결여되어 있고/또는 inlB 유전자 및 actA 유전자 모두에서, 및/또는 그것의 발현을 조절하는 요소에서 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 더욱이, 본 발명은 전술한 방법 및 용도에 유용한 다양한 조성물 및 균주를 제공한다. 예를 들어, 더 이상의 양태에서, 본 발명은 비돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주에 비하여 비포식 세포로의 침투는 약화되어 있지만, 포식 세포로 침투할 수 있는 능력은 보유하고 있는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 한 구체예에서, 돌연변이 균주의 게놈은 예를 들어, 인터날린과 같은 인바신(즉, 침투 단백질)을 코딩하는 적어도 하나의 유전자에, 및/또는 그것의 발현을 조절하는 요소 중에 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 다른 양태에서, 본 발명은 비돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주에 비하여 비포식 세포로의 침투는 약화되어 있지만, 포식 세포로 침투할 수 있는 능력은 보유하고 있으며, 항원을 코딩하는 이종 핵산 분자를 포함하는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 다른 양태에서, 본 발명은 비돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주에 비하여 비포식 세포로의 침투는 약화되어 있지만, 포식 세포로 침투할 수 있는 능력을 보유하고 있는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주를 포함하는 백신을 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 비돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주에 비하여 비포식 세포로의 침투는 약화되어 있지만, 포식 세포로 침투할 수 있는 능력을 보유하고 있는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주를 포함하는 수지상 세포와 같은 전문 항원-제시 세포를 제공한다. 전술한 양태 각각의 어떤 구체예에서, 리스테리아(Listeria) 의 돌연변이 균주는 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)) 돌연변이 균주이다. 전술한 양태 각각의 어떤 구체예에서, 리스테리아(Listeria)의 돌연변이 균주는 인터날린 B 가 결여되어 있다. 전술한 양태 각각의 어떤 구체예에서, 인터날린 B 가 결여되어 있는 리스테리아(Listeria) 의 돌연변이 균주의 게놈은 인터날린 B(inlB)를 코딩하는 유전자중에 및/또는 그것의 발현을 조절하는 요소 중에 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 다른 구체예에서, inlB 는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주의 게놈으로부터 제거되어 있다. 전술한 양태 각각의 또 다른 구체예에서, 돌연변이 균주는 인터날린 B 및 ActA 모두가 결여되어 있다. 어떤 구체예에서, 돌연변이 균주는 inlB 유전자(및/또는 inlB 유전자의 발현을 조절하는 요소) 및 actA 유전자(및/또는 actA 유전자의 발현을 조절하는 요소) 모두에서 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 추가의 양태에서, 본 발명은 인터날린 B가 결여된 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주를 포함하는 백신을 숙주에 투여하는 단계를 포함하는, 숙주에서 (암과 같은) 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다. 다른 양태에서, 본 발명은 인터날린 B 가 결여되어 있으며 항원을 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주를 포함하는 조성물의 유효량을 숙주에 투여하는 단계를 포함하는, 숙주에서 항원에 대한 면역반응을 유발하는 방법을 제공한다. 다른 양태에서, 본 발명은 인터날린 B가 결여되어 있으며 MHC 클래스 I 에피토프 또는 MHC 클래스 II 에피토프 각각을 포함하는 항원을 코딩하는 이종 핵산 분자를 포함하는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주를 항원-제시 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는, 체외 또는 체내에서 항원 제시 세포 상에 MHC 클래스 I 항원 제시 또는 MHC 클래스 II 항원 제시를 유발하는 방법을 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 (a) 인터날린 B가 결여되어 있으며, 항원을 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주를, 적당한 조건하에서 항원-제시 세포를 로딩하기에 충분한 시간동안, 숙주 유래의 항원-제시 세포와 접촉시키는 단계; 및 (b) 숙주에 항원-제시 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 숙주에서 항원에 대한 면역반응을 유발하는 방법을 제공한다. 한 구체예에서, 항원은 종양-연관 항원이거나 종양-연관 항원으로부터 유래된다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 인터날린 B가 결여되도록 리스테리아(Listeria) 균주를 변형시키는 단계를 포함하는, 백신에서 사용된 리스테리아(Listeria) 균주의 병원성을 감소시키는 방법을 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 백신을 제조하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 본 발명은 인터날린 B가 결여되어 있는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주를, 적당한 조건하에서 항원 제시 세포를 로딩하기에 충분한 시간동안 항원 제시 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는 백신을 제조하는 방법을 제공한다. 더욱이, 본 발명은 전술한 방법 및 다른 용도에 유용한 다양한 조성물 및 균주를 제공한다. 예를 들어, 또 다른 양태에서, 본 발명은 인터날린 B가 결여되어 있는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 한 양태에서, 돌연변이 균주의 게놈은 inlB 중에서, 또는 그것의 발현을 조절하는 요소중에 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 다른 양태에서, 본 발명은 인터날린 B가 결여되어 있으며, 항원을 코딩하는 이종 핵산 분자를 포함하는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 다른 양태에서, 본 발명은 인터날린 B가 결여되어 있는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주를 포함하는 백신을 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 인터날린 B가 결여되어 있는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주를 포함하는 수지상 세포와 같은 전문 항원-제시 세포를 제공한다. 전술한 양태 각각의 어떤 구체예에서, 리스테리아(Listeria) 의 돌연변이 균주는 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)의 돌연변이 균주이다. 전술한 양태 각각의 어떤 구체예에서, 인터날린 B가 결여되어 있는 리스테리아(Listeria)의 돌연변이 균주의 게놈은 인터날린 B(inlB)를 코딩하는 유전자중에, 및/또는 그것의 발현을 조절하는 요소중에 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 다른 구체예에서, inlB 는 돌연변이 리스테리아(Listeria) 균주의 게놈으로부터 결여되어 있다. 전술한 양태 각각의 또 다른 구체예에서, 돌연변이 균주는 인터날린 B 및 ActA 모두가 결여되어 있다. 어떤 구체예에서, 돌연변이 균주는 inlB 유전자(및/또는 inlB 유전자의 발현을 조절하는 요소) 및 actA 유전자(및/또는 actA 유전자의 발현을 조절하는 요소) 모두에서 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 추가의 양태에서, 본 발명은 인터날린 B와 같은 인터날린, 및 ActA 모두가 결여되어 있는 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes) 균주를 제공한다. 한 양태에서, 본 발명은 인터날린 B 및 ActA 모두가 결여되어 있는 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)) 균주를 제공한다. 어떤 구체예에서, inlB 유전자 및 actA 유전자 모두가 돌연변이화되어 있다. 한 구체예에서, inlB 유전자 및 actA 유전자 모두가 결실되어 있다. 한 구체예에서, 균주는 2003년 10월 3일에 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(ATCC)에 기탁되고 수탁번호 PTA-5562로 표시되는 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monoytogenes) △actA△inlB 이중 돌연변이(또는 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)) actA-inlB- 이중 돌연변이로 지칭함)이다. 다른 구체예에서, 균주는 PTA-5562로 표시된 균주의 돌연변이이며, 이 돌연변이는 야생형 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)에 비하여 비포식 세포로의 침투가 약화되어있다. 전술한 균주 중 어떤 것을 포함하는 백신을 포함하는 배양, 면역원성 조성물, 및 약학적 조성물이 또한 제공된다. 전술한 어떤 방법 및 모든 방법들에서 이들 특정 균주의 사용이 또한 제공된다.