보조제-첨가된 백신의 평가 document_id A220623041509

예를 들면 피하주사용 백신은 항원의 수용액 및 예를 들면, 수산화 알루미늄 겔과 같은 고체상 매개체를 혼합하여 혼합물을 생성하여 제조될 수 있는데, 여기서, 항원의 일부 이상이 고체상에 흡수되거나 또는 항원의 일부가 액체상이거나 항원 전부가 액체상이 아니다. 고체상 매개체는, 비록 상승작용의 메카니즘이 항상 완벽하게 이해되지는 않더라도, 항원의 면역반응의 효력을 상승시키는 보조제로써 작용할 수 있다. 또한, 고체상 매개체에 대한 항원의 자연적 흡수 및 메카니즘은 항상 완벽하게 이해되지는 않고 관련되는 항원의 종류에 강하게 의존한다. 그러나, 이론적으로는 수산화 알루미늄 겔로의 흡수는 부분적으로 정전기력과 관련 있다. 단백질에서, 인산화된 단백질의 인산염 기는 또한 수산화 알루미늄 겔과 상호작용하고, 가능하게는 겔 구조에서 수산화물 기를 다소 대체한다고 이해된다. 그 결과로, 흡수도는 문제의 특이적 단백질의 성질에 따라 변한다. 또한 예를 들면 풀 화분 알레르겐의 추출물 같은 생물학적 물질의 추출물 형태의 항원의 경우, 추출물은 고체상 매개체에 알레르겐의 결합을 잠재적으로 방해하는 많은 다른 이온과 분자를 함유한다. 면역학적 활성은 항원에 대해 항체를 생성하기 위해 검사 동물에 백신의 투여, 생물학적 시료의 수집 및 생성된 항체의 양을 측정하기 위한 시료 분석을 포함하는 인 비보(in vivo) 방법으로 측정될 수 있다. 알레르기 유발 활성 및 알레르기 반응의 유도의 잠재력은 감작(sensitised) 동물에 피내주사에 의해, 및 위트와 플레어 반응의 정도의 측정(Kildsgaard et al., Assessment of the in vivo allergenic potency of new allergy vaccine by intradermal testing in sensitised mice, Clinical Immunology and Allergy in Medicine, Proseedings of the 21st EAACl Congress 2002, Naples, Italy)에 의해 검사될 것이다. 그러나, 이러한 인 비보 방법은 시간이 많이 걸리고 고되며, 바람직하지 않은, 검사동물의 사용을 필요로 한다. SU-A-1 746 318은 진드기-매개 뇌염 백신 제제에서 항원의 정량 결정의 방법을 개시하는데, 여기서, 항원은 수산화 알루미늄에 흡수되고, 이 방법은 인산염 버퍼의 특이적 항체의 과량과 백신 제제와의 반응 및, 상청액에서 항체의 양의 면역효소적 결정을 포함한다. 정량 결과를 얻기 위해 검정보정(calibration) 그래프가 사용된다. Chang et al. (Vaccine 19 (2001) 2884-2889)은 백신에서 및 간질액에서 수산화 알루미늄 겔에의 리소자임 흡수도 및 토끼에서 면역 반응에 대한 그것의 효과를 시험하는 연구를 개시한다. 백신은 3~90%의 범위의 흡수도를 갖는 백신을 생성하기 위해 인산염 음이온과 전-처리된다. 3, 35 또는 85% 흡수를 나타내는 백신의 흡수도가 피하 투여를 자극하는 간질액과의 혼합 1시간 이내에 40%로 변화되었음이 발견되었다. 이 방법에 따라, 항-리소자임 항체 반응은 다른 흡수도를 갖는 백신에도 동일했다. Shi et al. (Vaccine 20 (2002) 80-85)은 알루미늄 보조제로의 난알부민의 흡수도를, 그리고 알루미늄 인산염 보조제로의 리소자임의 흡수도를 변화시키기 위한 간질액의 능력에 대한 연구를 개시한다. 난알부민 및 리소자임의 대부분은 37℃에서 림프액에 노출된 후에 완전하게 용출된다. 알루미늄 인산염 보조제로부터 리소자임을 용출하기 위한 림프액의 능력은 숙성된(aged) 백신처럼 변하지 않는다. 수산화 알루미늄에 흡수된 난알부민의 60%만이 4℃에서 11주 동안 백신을 숙성한 후에 림프액에 노출되어 있는 동안 용출된다. Lyer et al. (Vaccine 21 (2003) 1219-1223)은 난알부민 및 인이 제거된 알파 카세인은 수산화 알루미늄 백신에 흡수되나, 간질액에 노출되었을 때 완전하게 용출된다. 그럼에도 불구하고 백신은 단백질 용액과 비교된 면역학적 상승작용을 생성한다. 대조적으로, 알파 카세인은 백신에서 및 간질액의 노출시에 둘 다에서 수산화 알루미늄에 완전하게 흡수된다. 수산화 알루미늄에 의한 면역학적 상승 작용이 또한 알파 카제인에 대해서도 관찰되었다. 이러한 결과는 항원 제시 세포가 알루미늄-함유 보조제에 흡수되는 항원뿐만 아니라 간질액으로부터 흡수된 항원을 흡수할 수 있다는 것을 나타낸다. Kart et al. (Journal of Virological Methods, 25(1989) 101-108)는 비활성화된 수산화알루미늄 보조제-첨가된(adjuvanted) 바이러스 백신의 항원성 함량의 분석을 위한 ELISA를 개시한다. ELISA는 인 비보 시험에 보충하기 위해 언급된다. 다른 인 비트로 방법은 방사 면역분석법 및 수산화 알루미늄으로부터 항원 탈착을 요구하는 방법을 포함한다. 이러한 인 비트로 방법과는 달리, ELISA는 높은 농도의 수산화 알루미늄을 제외하고, 수산화 알루미늄으로부터 상당한 방해를 받지 않았다. ELISA에서 온전한(intact) 백신에 대한 수산화 알루미늄에 의한 과도한 저해의 이전의 시도가 언급되었다. 이 논문은 ELISA가 왜 작동하는지 다양하게 설명하고 있다. 최종 단락에서, 이 방법은 클래스로서 수산화 알루미늄 보조제-첨가된 바이러스 백신에 적용가능하다는 것이 제안된다. Thraenhart et al. (Journal of Biological Standardisation, (1989) 17, 291-309)는 광견병 바이러스 당단백질의 측정에 의한 광견병 바이러스 백신의 인 비트로 효능(potency) 검사를 하기 위한 ELISA를 개시한다. 효능 측정에 대한 수산화 알루미늄의 영향이 조사되었으나 아무런 영향을 끼치지 않다는 것이 판명되었다. US-A-4 127 385 (Weeke)는 알하이드로겔(alhydrogel)의 알레르겐에 혈청의 유리 lgE를 결합시키기 위해 알레르기 환자의 혈청과, 알하이드로겔에 부착된 스케일 및 말의 털에서 추출된 알레르겐을 혼합하고, 이어서 방사성-표지된 항-lgE를 첨가하고, 방사능을 측정하는 것을 포함하는 방법에 대해 기술한다. 이 방법은 알하이드로겔에 부착된 알레르겐 추출물의 저장기간 또는 강도를 결정하기 위해 사용될수 있다는 것이 지적되어 있다. 종래의 면역 분석의 이 유형은 항원에 특이적이지 않은 항체는 알하이드로겔-알레르겐에 어느 정도로 결합되고 부정확한 측정결과를 가져온다는 단점을 갖고 있다. 고체상 매개체에 항원 분자의 흡착 성질은 매우 복잡하고 대부분 알려져 있지 않고, 또한 그것은 항원의 화학적 및 구조적 성질에 의존하여 상이한 항원들 사이에서 변화한다. 더욱이, 고체상 매개체에 결합된 항원-특이적 lgE 및 고체상 항원간의 반응에서 고체상 매개체의 영향은 매우 복잡하고 완전하게 알려져 있지 않다. 그러므로, 항원 분자를 포함하는 기성(ready-to-use) 고체상 매개체 백신의 알레르기 반응의 잠재력 및 알레르기 유발 활성을 포함하는 면역학적 활성의 인 비트로 측정, 또는 적어도 그것을 정확하게 측정하는 것이 가능하지 않다고 믿어져왔다. 그러므로, 현재까지도 이 방법은 기성 고체상 매개체 백신의 제조에 사용되는 항원 분자의 용액의 면역학적 활성의 측정을 기초로 하는 백신의 면역학적 활성의 인 비트로 평가를 위한 통상적인 관행으로 여겨져왔다. 본 발명의 목적은 사용-준비된, 고체상 매개체, 항원 백신 분자의 면역학적 활성을 평가하는 인 비트로 방법을 제공하는 것이다.