인터루킨-10 항체, 이를 함유하는 약제학적 조성물 및 이의 제조방법 document_id A220623042147

초기에 사이토킨 합성 억제제 인자 또는 CSIF로 공지된, 인터루킨-10(IL-10)은 조혈 세포, 특히 면역 세포의 강력한 면역조절인자이다. 활성화된 Th2 세포, B 세포, 각질세포, 단핵세포 및 대식세포와 같은 세포는 IL-10을 생산한다[참조: Moore et al., Rev. Immunol. 11: 165 (1993)]. IL-10은 T 세포, 단핵세포 및 대식세포를 포함하는 다수의 세포의 활성화 및 효과기 작용을 억제한다. 특히, IL-10은 Th1 세포, 천연 킬러 세포, 단핵세포 및 대식세포와 같은 세포에 의해 IL-1, IFN-γ 및 TNF의 합성을 포함하는 사이토킨 합성을 억제한다[참조: Fiorentino et al., J. Exp. Med., 170: 2081-2095 (1989); Fiorentino et al., J. Immunol. 146: 3444 (1991); Hsu et al., Int. Immunol. 4: 563 (1992); Hsu et al., Int. Immunol. 4: 563 (1992); D''Andrea et al., J. Exp. Med. 178: 1041 (1993); de Waal Malefyt et al., J. Exp. Med. 174: 915 (1991); Fiorentino et al., J. Immunol. 147: 3815 (1991)]. 다수의 병원체, 특히 세포내 병원체는 면역 반응에 의해 병원체의 효과적인 제거를 지연시키거나 완전히 차단하기 위해 IL-10 생산을 유발한다[참조: Moore et al., Annu. Rev. Immunol. 11: 165 (1993)]. 예를 들어, HIV, 나병 또는 결핵을 지닌 환자로부터의 혈액 림프구에서, 말초 혈액 림프구는 병원체에 의한 챌린지시 시험관내에서 통상적으로 무력하거나 비반응성이다. 그러나, 여기서 IL-10의 중화는, 활성 효과기 반응, 즉, Th1 반응성이 이들 세포에 존재함을 입증한다. 즉, IL-10은, 이의 감염성 상태를 촉진시키기 위한 병원체에 의해 효과적으로 차출(commandeer)되는 것으로 여겨진다. IL-10은 또한 생체내에서 자가면역성과 관련되어 있다. 자가면역성은 자가항체, 자가반응성 T 세포, 또는 정상 조직을 표적화하는 이의 일부 조합으로부터의 발현에서 생성되었다. 자가면역병의 하나의 예는 신체 전체에서 결합 조직이 염증을 일으키는 만성 관절병인 전신홍반루푸스(SLE)이다. 정상 체 조직을 이것이 외부 침입물인 것처럼 공격하는 자가항체는 특징적인 염증을 초래한다. 정확한 원인은 완전히 이해되지 않았지만, 연구자들은, 이것이 유전적 및 환경적 성분 둘다를 지닌 것으로 여기고 있다. 상세하게는, B-세포 과반응성 및 각종 자가항체의 존재가 SLE를 특징지운다. 통상적으로 이본쇄 DNA(IgG 항-dsDNA abs)에 대해 반응성인 IgG 자가항체는 SLE 환자에서 상승된다. SLE 환자의 60 내지 70%는 IgG 항-dsDNA abs를 생성하며, 이들중 일부는 신독성이다. SLE는 안면 발진으로부터 불구 및 잠정적으로 생명을 위협하는 기관 기능장애에 이르는 범위의 증상을 지니며, 남성보다 여성에서 10배 더 만연한다. 이는 어떠한 연령에서도 진행될 수 있으나 젊은 성인에서 가장 일반적이다. 다수의 연구가 SLE와 관련된 병리학에서 IL-10에 대한 역할을 지지하고 있다. 예를 들면, IL-10은 전형적으로 적절한 자극없이는 세포에 의해 생산되지 않지만, SLE 환자로부터 B 세포 및 대식세포는 시험관내에서 높은 수준의 IL-10을 자발적으로 생산한다[참조: Llorente, et al., Arthritis Rheum. 40: 249-60 (1997)]. 몇몇 연구에서, 연구자들은, IL-10의 혈청 수준과 질병 활성간의 상관관계를 입증하였다. 또한, 생체내 및 시험관내 연구 둘다는, IL-10 생산의 차단이 SLE의 임상적인 소견을 완화시킬 수 있음을 입증하였다[참조: Gonzalez-Amaro, et al. J. Autoimmunity 11: 395-402 (1998)]. 지금까지, SLE의 소견중 하나인 루푸스 신장염은 면역억제 치료요법, 예를 들면, 코르티코스테로이드 및 사이클로포스파미드의 사용을 통해 치료되어 왔다. 비록 효과적이라고 해도, 이들 치료요법에는, 장기간의 치료요법을 방해하는 비-특이적이고 실질적인 독성이 존재한다. 따라서, 특이적인 중화 항체는 IL-10의 억제 효과는 제거하면서 나머지 면역 반응 네트웍은 손상시키지 않는 IL-10의 효과적인 길항제일 수 있다. 생체내에서 치료제로서 항체를 사용하는데 있어서 가장 현저한 제한은 항체의 면역원성이다. 대부분의 모노클로날 항체는 설치류로부터 기원하므로, 사람에 있어서 반복된 사용은 치료학적 항체에 대한 면역 반응의 생성을 초래한다. 이러한 면역 반응은 치료 효능을 최소로 상실하면서 잠정적으로 최대의 치명적인 초과민반응을 초래한다. 설치류 항체의 면역원성을 감소시키기 위한 초기 노력은 키메라 항체의 생산을 포함하며, 여기서, 마우스 가변 영역은 사람 고정 영역과 융합된다[참조: Liu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 3439 (1987)]. 그러나, 사람 가변 영역 및 마우스 고정 영역의 하이브리드를 주입한 마우스는 사람 가변 영역에 대해 지시된 강력한 항-항체 반응을 진행하며, 이는 이러한 키메라 항체내 전체 설치류 Fv 영역의 보유로 환자에서 원치않는 면역원성이 초래될 수 있음을 제안하고 있다. 일반적으로, 가변성 도메인의 상보성 결정 영역(CDR) 루프는 항체 분자의 결합 부위를 포함하는 것으로 여겨진다. 따라서, 사람 골격(framework)내로 설치류 CDR 루프의 이식(즉, 사람화)는 설치류 서열을 추가로 최소화하기 위해 시도되었다[참조: Jones et al., Nature 321: 522 (1986); Verhoeyen et al., Science 239: 1534 (1988)]. 그러나, CDR 루프 교환은 여전히 원래의 항체와 동일한 결합 특성을 지닌 항체를 균일하게 초래하지 못한다. 사람화된 항체내 CDR 루프 지지체중 포함된 잔기인 골격 잔기(FR)내 변화는 또한 항원 결합 친화성을 보존하는데 요구된다[참조: Kabat et al., Immunol. 147: 1709 (1991)]. 다수의 사람화된 항체 작제물에서 CDR 이식 및 골격 잔기 보존의 이용이 보고되어 있지만, 특정 서열이 목적한 결합 및 때때로 생물학적 특성을 지닌 항체를 생성할 것인지는 예견하기 어렵다[참조: Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 10029 (1980) Gorman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 4181 (1991), 및 Hodgson, Bio/Technology 9: 421 (1991)]. 더우기, 대부분의 선행 연구는 동물 경 및 중 가변 서열에 대한 상이한 사람 서열을 사용하여, 이러한 연구의 예견성이 의문시되고 있다. 공지된 항체의 서열이 사용되거나, 더욱 통상적으로 공지된 X-선 구조, 항체 NEW 및 KOL을 갖는 항체의 서열이 사용되고 있다[참조: Jones et al., 상기 참조; Verhoeyen et al., 상기 참조; 및 German et al., 상기 참조]. 정확한 서열 정보는 단지 약간의 사람화된 작제물의 경우에만 보고되어 있다. 본 발명은 사람 IL-10을 인지하고 특히 자가면역 질환과 관련하여 이의 활성을 조절하는 사람화된 모노클로날 항체를 제공한다. 사람화된 항체는 현재의 치료와 관련된 독성 및 비-특이성없이 대안적인 치료요법 선택을 제공한다. 발명의 간단한 요약 본원에서는 CDR1에서 서열 1, CDR2에서 서열 2 및 CDR3에서 서열 3으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드; 및 골격 영역(여기서, 골격 영역의 아미노산 서열은 모든 또는 실질적으로 모든 사람 면역글로불린 아미노산 서열이다)을 포함하는 하나 이상의 항체 경쇄 가변 영역 또는 이의 결합 단편; 및 CDR1에서 서열 6, CDR2에서 서열 7 및 CDR3에서 서열 8의 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드; 및 골격 영역(여기서, 골격 영역의 아미노산 서열은 모든 또는 실질적으로 모든 사람 면역글로불린 아미노산 서열이다)을 포함하는 하나 이상의 항체 중쇄 가변 영역 또는 이의 결합 단편을 포함하는, IL-10과 결합하는 사람화된 재조합 항체 분자, 또는 이의 결합 단편이 제공된다. 또한, 본원에서는 항체 경쇄 또는 이의 결합 단편이 서열 4의 가변 영역을 지닌 폴리펩타이드를 포함하는 항체를 제공한다. 하나의 특정 양태에서, 항체 경쇄 또는 이의 결합 단편은 서열 5의 가변 영역 및 고정 영역을 가진 폴리펩타이드를 포함한다. 하나의 특정 양태에서, 항체 중쇄 또는 이의 결합 단편은 서열 9의 가변 영역을 갖는 폴리펩타이드를 포함한다. 다른 특정 양태에서, 항체 중쇄 또는 이의 결합 단편은 서열 10의 가변 영역 및 고정 영역을 갖는 폴리펩타이드를 포함한다. 추가로 본원에서는 CDR1에서 서열 1, CDR2에서 서열 2 및 CDR3에서 서열 3으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 포함하는 하나 이상의 항체 경쇄 가변 영역 또는 이의 결합 단편; 및 CDR1에서 서열 6, CDR2에서 서열 7 및 CDR3에서 서열 8로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 포함하는 하나 이상의 항체 중쇄 가변 영역 또는 이의 결합 단편을 포함하는, IL-10에 결합하는 키메라 재조합 항체 분자 또는 이의 결합 단편이 제공된다. 또한, 본원에서는 CDR1에서 서열 11, CDR2에서 서열 12 및 CDR3에서 서열 13으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드; 및 골격 영역(여기서, 골격 영역의 아미노산 서열은 모든 또는 실질적으로 모든 사람 면역글로불린 아미노산 서열이다)을 포함하는 하나 이상의 항체 경쇄 또는 이의 결합 단편; 및 CDR1에서 서열 15, CDR2에서 서열 16 및 CDR3에서 서열 17로 이루어진 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드; 및 골격 영역(여기서, 골격 영역의 아미노산 서열은 모든 또는 실질적으로 모든 사람 면역글로불린 아미노산 서열이다)을 포함하는 하나 이상의 항체 중쇄 또는 이의 결합 단편을 포함하는, IL-10에 결합하는 사람화된 재조합 항체 분자 또는 이의 결합 단편이 제공된다. 하나의 특정 양태에서, 항체 경쇄 또는 이의 결합 단편은 서열 14의 가변 영역 및 고정 영역을 갖는 폴리펩타이드를 포함한다. 여전히 다른 특정 양태에서, 항체 중쇄 또는 이의 결합 단편은 서열 18의 가변 영역 및 고정 영역을 갖는 폴리펩타이드를 포함한다. 또한, 본원에서는 CDR1에서 서열 11, CDR2에서 서열 12 및 CDR3에서 서열 13으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 포함하는 하나 이상의 항체 경쇄 또는 이의 결합 단편; 및 CDR1에서 서열 15, CDR2에서 서열 16 및 CDR3에서 서열 17로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 포함하는 하나 이상의 항체 중쇄 또는 이의 결합 단편을 포함하는, IL-10에 결합하는 키메라 재조합 항체 분자 또는 이의 결합 단편이 제공된다. 하나의 양태에서, 상기 기술된 항체는 중쇄 고정 영역을 추가로 포함하며, 여기서, 상기 중쇄 고정 영역은 γ1, γ2, γ3 및 γ4 사람 중쇄 고정 영역 또는 이의 변이체를 포함한다. 하나의 양태에서, 상기 기술된 항체는 또한 경쇄 고정 영역을 포함하며, 여기서, 경쇄 고정 영역은 람다 또는 카파 사람 경쇄 고정 영역을 포함한다. 일부 양태에서, 이들 항체의 결합 단편은 Fab, Fab'', Fab''-SH, Fv, scFv, F(ab'')2, 및 디아바디(diabody)로 이루어진 그룹 중에서 선택된 항체 단편이다. 또한, 본원에는 IL-10의 생물학적 활성을 차단하는데 효과적인 양의 IL-10에 대해 특이적인 항체, 또는 이의 결합 단편을 면역 반응을 제어할 필요가 있는 환자에게 투여함을 포함하여, 사람 대상체에서 면역 반응을 제어하는 방법을 제공하며, 여기서, 상기 항체는 본원에 기술된 항체이다. 당해 방법에 의해 제어된 면역 반응은 체액성 반응 또는 세포성 반응이다. 하나의 양태에서, 당해 방법에 의해 치료된 대상은 전신홍반루푸스이다. 다른 양태에서, 대상은 면역 혈소판감소자색반(ITC)이다. 다른 양태에서, 대상은 루푸스 신장염이다. 추가의 양태에서, 대상은 HIV이다. 다른 양태에서, 대상은 C형 간염이다. 하나의 특정 양태에서, 사람 대상체에서 면역 반응을 제어하는 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 (1) IL-10의 생물학적 활성을 차단하기에 효과적인 양의 IL-10에 특이적인 항체, 또는 이의 결합 단편(여기서, 당해 항체는 본원에 기술된 항체이다), 및 (2) 면역제어제를 투여하는 것을 포함한다. 본원에는 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제와 배합된 항체 또는 이의 결합 단편을 포함하는 조성물이 제공되며, 여기서, 항체는 상기 기술된 항체중 하나이다. 또한, 본원에는 상기 기술된 항체의 폴리펩타이드를 암호화하는 분리된 핵산이 제공된다. 또한, 벡터로 형질감염된 숙주 세포에 의해 인지된 조절 서열에 작동적으로 결합된 분리된 핵산 서열을 포함하는 발현 벡터가 제공된다. 본원에는 분리된 핵산 서열을 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 또한, 본원에는 핵산 서열이 발현되는 조건하에서 벡터를 포함하는 숙주 세포를 배양함으로써 폴리펩타이드를 생산하고, 당해 폴리펩타이드를 숙주 세포로부터 회수함을 포함하는 폴리펩타이드의 생산 방법이 제공된다. 본원에는 서열 19의 핵산 서열을 갖는 경쇄 및 서열 20의 핵산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 IL-10에 특이적인 항체를 암호화하는 분리된 핵산 서열이 제공된다. 추가의 양태에서, 경쇄는 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(ATCC) 기탁번호 제PTA-5923호를 지니고 중쇄는 ATCC 기탁번호 제PTA-5922호를 지닌다. 본원에는 서열 21의 핵산 서열을 지닌 경쇄 및 서열 22의 핵산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 IL-10에 대해 특이적인 항체를 암호화하는 분리된 핵산 서열이 제공된다. 추가의 양태에서, 경쇄는 ATCC 기탁번호 제PTA-5927호를 지니고 중쇄는 ATCC 기탁번호 제PTA-5926호를 지닌다. 또한 본원에는 상기 핵산 서열이 암호화하고 있는 항체의 결합 단편을 암호화하는 분리된 핵산 서열이 제공된다. 하나의 양태에서, 결합 단편은 Fab, Fab'', Fab''-SH, Fv, scFv 및 F(ab'')2로 이루어진 그룹 중에서 선택된 항체 단편이다. 본원에는 a) 목적하는 생물학적 활성을 지닌 비-사람 항체를 확인하는 단계; b) 비-사람 항체 VH 및 VL 도메인의 아미노산 서열을 측정하는 단계; c) 사람 배선(germline) 서열의 그룹에 대해 비사람 항체 서열을 비교하는 단계; 및 d) 최대 총 잔기 점수를 갖는 사람 배선 서열을 수용체 배선 서열로서 확인하는 단계를 포함하여, 사람화된 항체에 대한 수용체 배선 서열을 확인하는 방법이 제공되며, 여기서, 상기 단계 c)에서의 비교는 1) 비-사람 VH 및 VL 도메인의 서열에 서열 잔기 번호를 지정하는 단계; 2) 서열내 CDR 및 FR 영역을 묘사하는 단계; 3) 비-사람 및 사람 배선 서열이 확인되도록 각각의 잔기 위치에서 예정된 점수를 지정하는 단계; 및 4) 각각의 사람 배선 서열에 대한 총 점수를 생성시키기 위해 잔기 점수 모두를 합하는 소 단계를 포함한다. 하나의 양태에서, 당해 방법은 또한 5) 비-사람 및 사람 배선 서열이 동일한 각각의 잔기 위치[이는 소단계 (4)이후 총 잔기 점수와 동일한 배선 서열에 대해 소단계 (3)에서 기록되지 않았다]에 대해 수치 1을 지정하는 단계; 및 6) 잔기 점수 모두를 합하여 각각의 사람 배선 서열에 대한 총 점수를 생성시키는 단계를 포함하는 소단계들을 추가로 포함한다. 특정 양태에서, 비-사람 항체는 IL-10에 대해 특이적이며 IL-10의 생물학적 활성을 억제한다. 특정 양태에서, 수치는 각각 VH 및 VL 영역에 대한 표 2 및 3에서와 같이 잔기에 지정된다. 본원은 또한 상기 방법에 의해 생성된 항체를 제공한다.