효소 검출 기법 document_id A220623044467

시험 시료 내의 특정 효소의 존재 또는 양을 구하는 것이 종종 바람직할 때가 있다. 일부 경우에서는, 효소의 존재만으로도, 예를 들어 조직 또는 장기 손상의 존재를 나타낼 수 있다. 마찬가지로, 비정상 효소 농도도 또한 다른 상태, 예컨대 박테리아 또는 바이러스 감염을 나타낼 수도 있다. 예를 들어, 프로테아제(예를 들어, 아스파르트산 프로테아제) 및 메탈로펩티다아제는 칸디다 질염("효모 감염")의 원인이 될 수 있는 미생물인 칸디다 알비칸스(Candida albicans)의 병원성을 증가시키는 것으로 믿어진다. 시험 시료 내 효소의 존재 또는 농도는 일부 유형의 암 및 다른 상태에 대한 진단용 마커(marker)의 역할을 할 수도 있다. 예를 들어, 전립선-특이적 항원(PSA)은 전립선암에 있어 잘 알려진 마커이다. 진단용 마커의 다른 예에는 카텝신 B(암), 카텝신 G(폐기종, 류마티스성 관절염, 염증), 플라스미노겐 활성제(혈전증, 만성 염증, 암), 및 유로키나아제(암)이 포함된다. 효소의 존재를 검출하기 위한 한 통상적인 기법이 브라아크-막스비티스 등에 허여된 미국 특허 제6,348,319호에 기재되어 있다. 브라아크-막스비티스 등은 효소에 의한 기질의 소화를 감지함으로써 기능한다. 예를 들어, 브라아크-막스비티스 등은 제1 구역(11) 및 제2 구역(12)을 포함하는 장치(10)를 예시한다. 제1 구역(11)에는 프로테아제(16)에 의해 절단가능한 펩티드 연결기(15)를 통해 스트렙타비딘(14)(리포터(reporter))에 연결된 고분자 비드(13)(담체)가 마련되어 있다. 프로테아제(16)를 첨가할 때, 스트렙타비딘(14)이 방출되어, 제2 구역(12)을 통과하는데, 이 구역에서는 막의 임피던스 변화를 통해 스트렙타비딘의 존재를 검출하는 바이오센서 막(17)이 포함되어 있다(칼럼 5, II. 25-30). 그러나 안타깝게도, 브라아크-막스비티스 등에 의해 기술된 것과 같은 기법은 특정 종류의 응용분야, 예컨대 환자에 의한 비교적 빠른 진단을 필요로 하는 경우(자가진단 또는 의료진의 보조 하에), 너무 복잡하고 비용이 너무 많이 든다. 이에 따라, 시험 시료 내 효소의 존재를 정확히 검출하기 위한 간단하고 저렴한 기법에 대한 필요성이 현재 존재한다. 발명의 개요 본 발명의 한 실시양태에 따라, 시험 시료 내의 효소 또는 그의 억제제를 검출하기 위한 진단용 키트가 개시된다. 키트는, 각기 리포터 및 특이적 결합 구성원에 연결된 기질을 포함하는 복수개의 반응성 착체를 포함한다. 기질은 효소(예를 들어, 가수분해 효소)에 의해 절단가능하다. 예를 들어 한 실시양태에서는, 리포터가 검출가능한 물질로 표지된 입자를 포함한다. 키트는 시험 시료와 교통하도록 위치될 수 있는 크로마토그래피용 매체(예를 들어, 다공성 막)를 추가로 포함한다. 크로마토그래피용 매체는 그 내부에 특이적 결합 구성원이 포획될 수 있는 제1 검출 구역을 한정한다. 제1 검출 신호가 제1 검출 구역 내에서, 예컨대 그 내부에 고정화된 리포터에 의해 발생될 수 있다. 제1 검출 신호의 강도는 시험 시료 내의 효소의 양에 반비례할 수 있으며, 마찬가지로 시험 시료 내의 효소 억제제의 양에 정비례할 수 있다. 특정 실시양태들에서는, 크로마토그래피용 매체가 그 내부에 리포터가 포획될 수 있는 제2 검출 구역을 추가 포함할 수 있다. 예를 들어, 한 실시양태에서는, 리포터에 대해 친화성이 있는 수용 물질이 제2 검출 구역 내에 고정되어 있다. 제2 검출 신호는 제2 검출 구역 내에서, 예컨대 그 안에 고정되어 있는 리포터에 의해 발생될 수 있다. 제2 검출 신호의 강도는 시험 시료 내 효소의 양에 정비례할 수 있으며, 마찬가지로 시험 시료 내의 효소 억제제의 양에 반비례할 수 있다. 본 발명의 또 다른 실시양태에 따르면, 시험 시료 내의 효소 또는 그의 억제제를 검출하는 방법이 개시된다. 방법은 시험 시료를, 각기 리포터 및 특이적 결합 구성원에 연결된 기질을 포함하는 복수개의 반응성 착체와 접촉시켜 인큐베이션 혼합물을 형성하는 것을 포함한다. 기질은 리포터 및 특이적 결합 구성원을 방출하도록 효소에 의해 절단가능하며, 리포터는 검출 신호를 직접적으로 또는 간접적으로 발생시킬 수 있다. 방법은 또한 인큐베이션 혼합물을, 특이적 결합 구성원이 그 내부에서 포획될 수 있는 제1 검출 구역을 한정하는 크로마토그래피용 매체에 적용하는 것을 추가 포함한다. 제1 검출 구역 내의 검출 신호의 존재 또는 강도가 확인된다. 본 발명의 다른 특징 및 측면을 하기에 더욱 상세히 기술한다.