Ｐ５３ 기능을 대체하거나 작동시키는 소형 분자 document_id A220623051408

모든 유방암의 3/2 정도는 종양 억제자 p53에서 돌연변이를 보이고(Lai et al.(2004) Breast Cancer Res. Treat., 83: 57-66), 모든 진전된 인간 유방암종의 1/3 정도는 친-아폽토시스 Bcl-2 계통 구성원 Bax의 발현에서 현저한 감소를 나타낸다(Krajewski et al. (1995) Cancer Res., 55: 4471-4478). Bax와 p53 돌연변이는 모든 인간 종양의 높은 발병률과 연관한다. p53 돌연변이 또는 감소된 Bax 발현을 보이는 환자의 하위집단은 일반적으로, 치료에 불량하게 반응하고 더욱 급속하게 성장하는 종양 및 더욱 짧은 평균 생존기간(median survival)을 나타낸다(Lai et al., supra; Reed (1996) J. Clin. Invest., 97:2403-2404). 광범위한 추적에도 불구하고, 정상 세포, 악성 세포, 또는 사멸 세포에서 Bax 발현이 조절되는 기전은 아직 밝혀지지 않고 있다. Bax 발현의 현재까지 유일하게 알려진 내인성 활성인자는 p53 전사 인자(transcription factor)인데, 이는 암성 세포와 손상된 세포에서 세포 사멸(cell death)을 유도하는 역할을 한다(Miyashita and Reed (1995) Cell, 80: 293-299). 본 발명의 요약 본 발명에서는 p53 모방제(mimetics)/작동제(agonist)로서 기능하는 약제를 확인하는데 적합한 신규한 스크리닝 시스템을 제시한다. 또한, 효과적인 p53 모방제/작동제를 제시한다. 따라서, 특정 구체예에서, 본 발명은 p53 미경험 세포(가령, 종양 세포)에서 세포 사멸을 촉진하는 화합물을 제시한다. 특히 선호되는 화합물은 화학식 I 화합물, 또는 제약학적으로 허용되는 이의 에스테르 또는 염인데, R1과 R4는 독립적으로, 아미노 기, 시아노 기, 니트로 기, 카르복실 기, 할로, 하이드록실, SO2, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C1-8 알콕실, C1-11 알콕시알킬, C1-6 알킬아미노, C1-6 아미노알킬 등에서 선택되고; R2와 R3은 독립적으로, C, N 등에서 선택되고; R5는 C 또는 O이고; R6과 R7은 독립적으로, H, 할로겐, CN, NO2, C1-10 가지형이나 선형 포화되거나 불포화된 알킬, C1-10 가지형이나 선형 알콕시, C1-10 가지형이나 선형 아실, C1-10 가지형이나 선형 아실옥시, C1-10 가지형이나 선형 알킬티오, 아미노술포닐, 아릴, 아로일, 아릴옥시, 아릴술포닐, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시 등에서 선택되고; R8은 NO2, OH, COOH 등에서 선택되고; R9는 H, CH3 등에서 선택된다. 특정 구체예에서, R6과 R7은 둘 모두 할로겐이다. 다양한 구체예에서, R1과 R4는 둘 모두 아미노이다. 다양한 구체예에서, R2와 R3은 둘 모두 N이다. 다양한 구체예에서, R8은 NO2이다. 특정 구체예에서, 화합물은 화학식 II를 보유한다. 또한, p53 미경험 세포(가령, 고형 종양, 전이 세포, 비-고형 종양 암을 비롯한 암세포)에서 세포 사멸을 촉진하는 방법을 제시한다. 상기 방법은 전형적으로, ras의 전사를 유도하는 화합물과 상기 세포를 접촉시키는 단계를 포함한다. 다양한 구체예에서, 상기 화합물은 본 명세서에 기술된 화학식 I 화합물이다. 다양한 구체예에서, 상기 화합물은 제약학적으로 허용되는 부형제 내에 존재한다. 특정 구체예에서, 세포는 간암 세포, 유방암 세포, 결장암 세포, 폐암 세포, 자궁암 세포, 난소암 세포, 전립선암 세포, 또는 결장암 세포이다. 또한, p53 미경험 세포에서 세포 사멸을 촉진하는 약제를 스크리닝하기 위한 세포주를 제시한다. 상기 세포주는 전형적으로, 5'UTR, TATAA 서열 및 p53에 결합하는 하나이상의 공통 서열(consensus sequence)을 포함하는 bax 프로모터 요소를 포함하는 핵산 구조체를 보유하는 포유동물 세포를 포함하고, 상기 bax 프로모터 요소는 리포터에 작동가능하게 연결되고, 따라서 하나이상의 상기 공통 서열에 p53 단백질의 결합은 상기 리포터의 전사를 유도하거나 증가시킨다. 특정 구체예에서, 리포터는 형광 단백질, 루시페라제, 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라아제(CAT), β-갈락토시다아제(β-gal), 알칼리성 포스파타제, 양고추냉이 과산화효소(HRP), 또는 성장 호르몬(GH)에서 선택된다. 특정 구체예에서, 리포터는 루시페린 유전자 또는 cDNA를 포함한다. 다양한 구체예에서, 포유동물 세포는 p53 미경험 세포(가령, HEK293T 세포)이다. 또한, 본 발명에서는 p53 미경험 세포에서 세포 사멸을 촉진하는 약제를 확인하는 방법을 제시한다. 상기 방법은 본 명세서에 기술된 세포주로부터 하나이상의 세포를 한가지이상의 검사 약제와 접촉시키고; 상기 세포에서 리포터로부터 신호를 검출하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 리포터로부터 신호 증가는 상기 약제가 p53 미경험 세포에서 세포 사멸을 촉진할 가능성이 높은 약제임을 암시한다. 특정 구체예에서, 복수의 검사 약제가 세포에 동시에 접촉한다. 특정 구체예에서, 단일 검사 약제가 세포에 접촉한다. 다양한 구체예에서, 신호 증가는 검사 약제가 부재하거나, 또는 더욱 낮은 농도로 검사 약제를 포함하는 대조와 비교하여 측정된다. 특정 구체예에서, 상기 방법은 로봇 장치(robotic system)에 의해 수행된다. 다양한 구체예에서, 검사 약제는 ChemBridge DiverSet E, Bionet 1, CEREP, Maybridge 1, Maybridge 2, Peakdale 1, Peakdale 2, ChemDiv Combilab and International, Mixed Commercial Plate 1, Mixed Commercial Plate 2, Mixed Commercial Plate 3, Mixed Commercial Plate 4, ChemBridge Microformat, Commercial Diversity Setl, NCI Structural Diversity Set version 1, NCI Structural Diversity Set version 2, NCI Mechanistic Diversity Set, NCI Open Collection 1, NCI Open Collection 2, NINDS Custom Collection, SpecPlus Collection, BIOMOL ICCB Known Bioactives, ICCB Discretes Collections, ICCB2, ICCB3, ICCB4, NCI Marine Extracts, Aqueous fractions - NCI Plant and Fungal Extracts, Organic fractions - NCI Plant and Fungal Extracts, Philippines Plant Extracts 1, Philippines Plant Extracts 2, Starr Foundation Extracts 1에서 선택되는 라이브러리로부터 유래된다. 정의 “p53 미경험 세포”는 결함성 p53 및/또는 감소된 활성을 갖는 p53을 발현하거나, 또는 정상적인 p53을 과소발현하는 세포를 의미한다. 전형적으로, p53 미경험 세포는 “정상적인” 세포에 비하여 감소된 p53 종양 억제자 활성을 보인다. “리포터” 또는 “리포터 유전자”는 분광학적, 광화학적, 생화학적, 면역화학적, 전기적, 광학적 및/또는 화학적 수단에 의해 검출될 수 있는 산물을 발현하는 유전자 또는 cDNA를 의미한다. 이와 관련하여 유용한 리포터/라벨에는 발광 단백질, 형광 단백질(가령, 녹색 형광 단백질(GFP), 적색 형광 단백질(RFP) 등), 효소(가령, 양고추냉이 과산화효소(HRP), 알칼리성 포스파타제, β-갈락토시다아제(β-gal) 및 ELISA에 통상적으로 사용되는 다른 효소) 등이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. “프로모터에 작동가능하게 연결된 리포터 유전자”는 프로모터가 리포터 유전자의 전사를 조절하도록 배치된 프로모터와 리포터 유전자를 의미한다. “검사 약제”는 본 명세서에 기술된 한가지이상의 검사법으로 스크리닝될 수 있는 약제를 의미한다. 상기 약제는 실질적으로 임의의 화학적 화합물일 수 있다. 이는 분리된 단일 화합물로서 존재하거나, 또는 화학적(가령, 조합) 라이브러리의 한 구성원일 수 있다. 특히 바람직한 구체예에서, 검사 약제는 소형 유기 분자이다. “소형 유기 분자”는 제약 분야에 일반적으로 사용되는 유기 분자에 필적하는 크기의 분자를 의미한다. 여기에는 생물학적 거대분자(가령, 단백질, 핵산 등)가 배제된다. 바람직한 소형 유기 분자의 크기는 최대 5000 Da, 더욱 바람직하게는 최대 2000 Da, 가장 바람직하게는 최대 1000 Da이다.