항-ＦＣ-감마 ＲＩＩＢ 수용체 항체 및 그의 용도 document_id A220623051446

항체는 항원에 결합하여 그의 내인성 표적 (예를 들어 수용체 또는 리간드)에 대한 항원의 결합을 억제하거나 항원 제거를 야기하는 효과기 반응을 유도함으로써 항원을 중화시킨다. 신체에 대해 외래 물질인 항원을 효율적으로 제거 및(또는) 파괴하기 위해서, 항체는 그의 항원에 대한 높은 친화도 및 효율적인 효과기 기능을 모두 보여야 한다. 다중특이성을 갖는 항체 (예를 들어 이중특이적 항체)는 여러 항원의 상보적인 또는 상승적인 반응 매개에 유용하다. 항체 효과기 기능은 항체 Fc 영역에 의해 매개된다. 효과기 기능은 2개의 카테고리로 분류된다: (1) 항체의 항원에 대한 결합 후에 작용하는 효과기 기능 (이 기능은 보체 캐스케이드 또는 Fc 수용체 (FcR) 함유 세포의 참여를 수반한다) ; 및 (2) 항원 결합과 무관하게 작용하는 효과기 기능 (이 기능은 순환계에서 항체의 존속 및 트랜스사이토시스 (transcytosis)에 의해 세포 장벽을 가로질러 전달되는 그의 능력을 부여한다) (예를 들어, Ward and Ghetie, 1995, Therapeutic Immunology 2:77-94 참조). 항체 및 항체-항원 복합체와 면역계 세포의 상호작용은 예를 들어 항체 의존성 세포 매개 세포독성 (ADCC) 및 보체 의존성 세포독성 (CDC)과 같은 반응을 야기한다 (Daeron, 1997, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234; Ward et al., 상기 문헌; Ravetch et al., 1991, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492; 및 Ravetch et al., 2000, Science 290:84-89). Fc 수용체는 수용체의 동족 (cognate) 항체의 Fc 영역에 결합함으로써 항체 효과기 기능을 매개하기 때문에, FcR은 면역글로불린 이소형(isotype)에 대한 그의 특이성에 의해 규정된다. IgG 항체에 특이적인 Fc 수용체는 FcγR로 언급되고; IgE 항체에 특이적인 Fc 수용체는 FcεR로 언급되고; IgA 항체에 특이적인 Fc 수용체는 FcαR로 언급된다. FcγR의 3개의 서브클래스, 즉 FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) 및 FcγRIII (CD16)가 확인되었다. 각각의 FcγR 서브클래스는 교대 RNA 스플라이싱을 거쳐 다중 전사체 및 FcγR 이소형의 큰 다양성의 존재를 야기하는 2 또는 3개의 유전자에 의해 코딩된다. 인간 FcγRI 서브클래스 (FcγRIa, FcγRIb 및 FcγRIc)를 코딩하는 3개의 유전자는 염색체 1의 긴 암의 구역 1q21.1에 클러스터링되고; 인간 FcγRII 이소형 (FcγRIIa, FcγRIIb 및 FcγRIIc)을 코딩하는 유전자는 구역 1q23-24에 클러스터링되고; 인간 FcγRIII (FcγRIIIa 및 FcγRIIIb)를 코딩하는 2개의 유전자는 구역 1q22에 클러스터링된다. FcγRIIC는 FcγRIIA 및 FcγRIIB 사이의 불균등한 유전자 교차로부터 형성되고, FcγRIIB의 세포외 구역 및 FcγRIIA의 세포질 구역으로 이루어진다. FcγRIIA는 트랜스멤브레인 수용체 FcγRIIA1을 코딩한다. 교대 RNA 스플라이싱은 트랜스멤브레인 구역이 결여된 FcγRIIA2를 생성시킨다. FcγRIIA 유전자의 대립유전자 변이체는 IgG에 결합하는 능력이 상이한 고반응 (HR) 또는 저반응 (LR) 분자를 생성시킨다. HR 및 LR FcγRIIA 분자는 위치 27 및 131에 대응하는 2개의 아미노산에서 상이하다. FcγRIIB는 스플라이스 (splice) 변이체 FcγRIIB1, FcγRIIB2 및 FcγRIIB3을 코딩한다. FcγRIIB1 및 FcγRIIB2는 FcγRIIB1의 세포질 도메인 내의 19개 아미노산 삽입에 의해 상이하고; FcγRIIB3은 FcγRIIB2와 동일하지만, 추정 시그날 펩티다제 절단 부위에 대한 정보가 결여되어 있다. 또한, 수용체는 IgG에 대한 그의 친화도에 의해 구분된다. FcγRI은 IgG에 대한 높은 친화도 (Ka =108-109M-1)를 보이고 (Ravetch et al., 2001, Ann. Rev. Immunol. 19:275-290), 단량체 IgG에 결합할 수 있다. 이와 대조적으로, FcγRII 및 FcγRIII은 단량체 IgG에 대한 비교적 약한 친화도 (Ka ≤107M-1)를 보이고 (Ravetch et al., 상기 문헌), 단지 다량체 면역복합체와만 효과적으로 상호작용한다. 상이한 FcγR 아형은 상이한 세포 종류 상에서 발현된다 (Ravetch, J.V. et al., Annu. Rev. Immunol. 9:457-492). 예를 들어, 단지 FcγRIIIA만이 NK 세포 상에서 발현된다. 항체의 상기 수용체에 대한 결합은 NK 세포에 전형적인 ADCC 활성을 야기한다. 인간 FcγRIIIB는 호중구에서만 발견되는 반면에, FcγRIIIA는 대식세포, 단핵구, 자연 킬러 (NK) 세포, 및 T-세포의 하위 집단 상에서 발견된다. 다른 한편으로, 단량체 IgG에 대한 낮은 친화도를 갖는 FcγRII 수용체는 가장 널리 분포된 FcR이고, 대체로 동일한 세포 상에서 동시 발현된다. FcγRII (CD32에 의해 코딩됨)는 B 세포, 단핵구, 과립구, 비만 세포 및 혈소판 상에서 강하게 발현되지만, 몇몇 T 세포는 수용체를 보다 낮은 수준으로 발현한다 (Mantzioris, B. X. et al., 1993, J. Immunol. 150:5175-5184; 및 Zola, H. et al., 2000, J. Biol. Regul. Homeost. Agents, 14:311-316). 예를 들어, 인간 FcγRIIB 수용체는 B 세포, 골수 세포 및 비만 세포 상에 우세하게 분포된다 (Ravetch J.V. and et al., 2000, Science 290:84-89). FcγRIIA 및 FcγRIIB 이소형은 매우 유사한 세포외 도메인 (약 92% 아미노산 서열 동일성)을 포함하지만, 세포질 구역에서 상이하여 "활성화 수용체" (FcγRIIA) 및 "억제 수용체" (FcγRIIB)로서의 기능적 차이를 야기한다. FcγRI 및 FcγRIII 수용체는 또한 활성화 수용체로서 기능한다. 상기 활성화 수용체는 세포질 도메인에 19개 아미노산의 면역수용체 티로신계 활성화 모티프 (ITAM)를 포함한다. ITAM 서열은 티로신 키나제의 src 및 syk 패밀리의 활성화를 촉발시키고, 이는 다시 다양한 세포 매개체, 예를 들어 P13K, PLCγ 및 Tec 키나제를 활성화시킨다. 상기 활성화의 순수한 결과는 소포체 저장물로부터 세포내 칼슘 방출을 증가시키고 용량 결합 (capacitance-coupled) 칼슘 채널을 개방시켜 지속적인 칼슘 반응을 생성시키는 것이다. 상기 칼슘 유동은 과립 함유물의 세포외 유출, 포식작용 (phagocytosis)의 자극, ADCC 반응 및 특이적인 핵 전사 인자의 활성화에 중요하다. FcγR 활성화에 의해 매개되는 세포 반응은 주변 관용성 (peripheral tolerance)의 유지, 활성화 반응 역치의 조절에서 및 최종적으로 IgG 매개 효과기 자극의 종결시에 억제성 FcγRIIB 수용체에 의해 조절된다 (Ravetch, J.V. et al., Annu. Rev. Immunol. 19:275-290 (2001)). 상기 조절은 항원-IgG 항체 면역복합체를 통한 활성화 수용체와 억제성 FcγRIIB 수용체의 가교결합에 의해 개시된다 (예를 들어, Ravetch, J.V. et al., 2000, 상기 문헌 참조). ITAM 함유 활성화 수용체의 가교결합은 FcγRIIB 세포질 도메인에서 13개 아미노산의 면역수용체 티로신계 억제 모티프 (ITIM) 내의 티로신 인산화를 야기한다. 상기 FcγRIIB의 "활성화"는 특이적인 SH2 함유 이노시톨 폴리포스페이트-5-포스파타제 (SHIP)의 동원을 개시시킨다. SHIP은 막 이노시톨 지질 PIP3의 가수분해를 촉매화하여 PLCγ 및 Tec 키나제의 활성화를 억제하고, 용량 결합 채널을 통한 칼슘의 유입에 의해 매개되는 지속적인 칼슘 유동을 차단시킨다. FcγRIIB가 ITAM 함유 활성화 수용체를 불리하게 조절하는 한편 (Daeron, M. et al., 1995, Immunity 3:635 - 646), RTK-매개 세포 증식의 조절에서 수용체 티로신 키나제 (RTK) c-kit도 불리하게 조절하는 것으로 밝혀졌다 (Malbec, O. et al., 1999 J. Immunol. 162:4424-4429). FcγRII 수용체에 결합하는 항체가 문헌 [Looney et al., (1986) J. Immunol. 136: 1641-1647; Zipf et al., (1983) J. Immunol. 131:3064-3072; Pulford et al., (1986) Immunology 57:71-76; Greenman et al., (1991) Mol. Immunol. 28:1243-1254; Ierino et al., (1993) J. Immunol. 150:1794-1803. Weinrich et al., (1996) Hybridoma, 15:109-116; Sonderman et al., (1999) Biochemistry, 38:8469-8477; Lyden, T.W. et al (2001) J. Immunol. 166:3882-3889; 및 국제 출원 공개 WO 2004/016750 (2004년 2월 26일 공개)]에 기재된 바 있다. 고친화도 IgER1 수용체인 FcεRI는 예를 들어 알레르기 반응 동안 IgE의 결합시에 항원 유도 히스타민 방출을 위한 신호전달을 매개한다 (von Bubnoff, D. et al., (2003) Clinical 0026# Experimental Dermatology. 28(2): 184-187). FcγRIIB 수용체는 FcεRI과 상호작용하여 FcγRIIB ITIM 도메인을 통한 FcεRI의 활성을 억제하는 것으로 밝혀졌다 (Daeron, M. et al., (1995) J. Clin. Invest. 95:577-585; Malbec, O. et al., (1998) J. Immunol 160:1647-1658); 및 Tam, S.W. et al., (2004) Allergy 59:772-780). 인간 FcγRIIB에 특이적으로 결합하는 항체가 연구 뿐만 아니라 질병 치료를 위한 FcγRIIB 및 FcεRI 활성의 조작을 위해 필요하다. 003c#본 발명의 요지003e# 본 발명은 인간 FcγRIIB에 선택적으로 결합하는 항원 결합 폴리펩티드 또는 항체를 제공한다. 본 발명의 항원 결합 폴리펩티드 또는 항체는 다른 인간 FcγR에 결합하는 것보다 유의하게 더 양호한 친화도로 인간 FcγRIIB에 결합하고, 일부 실시태양에서 본질적으로 인간 FcγRIIA와 교차반응할 수 없다. 일부 실시태양에서, 인간 FcγRIIB에 선택적으로 결합하는 본 발명의 항원 결합 폴리펩티드 또는 항체는 서열 1, 2, 3, 4, 5 및 6 중의 적어도 하나 이상의 CDR (항체 상보성 결정 구역)을 포함하고, 추가의 실시태양에서 서열 1, 2 및 3의 중쇄 CDR 및(또는) 서열 4, 5 및 6의 경쇄 CDR을 포함한다. 추가의 실시태양에서, 본 발명의 항체는 서열 1, 2, 3, 4, 5 및 6 중의 하나 이상의 CDR의 변이체인 하나 이상의 CDR을 포함하고, 상기 변이체는 서열 1, 2, 3, 4, 5 및 6 중의 하나 이상의 CDR과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 추가의 실시태양에서, 변이체 항원 결합 폴리펩티드 또는 항체는 인간 FcγRIIA와 본질적으로 계속 교차반응할 수 없으면서, FcγRIIB에 대한 항체 5A6의 친화도보다 약 10배 미만 내지 약 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 5배, 적어도 10배, 적어도 50배 더 큰 친화도로 FcγRIIB에 결합한다. 추가의 실시태양에서, 본 발명의 항원 결합 폴리펩티드 또는 항체는 서열 7의 중쇄 가변 도메인 및(또는) 서열 8의 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시태양에서, 본 발명의 항원 결합 폴리펩티드 또는 항체는 모노클로날 항체, 키메릭 항체 또는 인간화 항체, 또는 모노클로날, 키메릭 또는 인간화 항체의 단편이다. 일부 실시태양에서, 모노클로날, 키메릭, 인간화 또는 다중특이적 항체, 또는 이들의 단편을 포함하는 본 발명의 항원 결합 폴리펩티드 또는 항체는 ATCC 기탁 번호 PTA-4614의 하이브리도마 세포주로부터 생산된 항체로부터 유도된다. 본 발명의 항원 결합 폴리펩티드 또는 항체는 치료 항체 또는 화학치료제에 의해 치료되는 질병 또는 질환의 치료 방법에서 치료 항체 또는 화학치료제와 함께 투여된다. 본 발명은 상기 설명한 것을 포함하여 FcγRIIB에 선택적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 폴리펩티드 및 활성화 수용체, 예를 들어 FcεRI에 특이적으로 결합하는 제2 항체 또는 항원 결합 폴리펩티드를 포함하는 단리된 이중특이적 항체를 제공한다. 일부 실시태양에서, 이중특이적 항체는 중쇄간 디술피드 연결이 불가능한 변이체 중쇄 힌지 구역을 포함한다. 본 발명의 이중특이적 항체는 예를 들어 알레르기, 천식 및 염증과 관련된 면역 반응 억제 및 히스타민 방출 억제 방법에 유용하다. 본 발명의 일부 실시태양에서, 본 발명의 이중특이적 항체는 세포에서 FcγRIIB 수용체를 활성화 수용체와 함께 동시 응집시켜 포유동물 세포에서 FcγRIIB 수용체를 활성화시킬 때 유용하다. 일부 실시태양에서, 포유동물 세포는 인간 세포이다. 추가의 실시태양에서, 인간 세포는 T 세포, B 세포, 비만 세포, 호염기구, 항원 제시 세포, 대식세포 및(또는) 단핵구이다. 일반적인 ITIM 단백질 매개 억제를 수반하는 실시태양에서, 상기 억제는 일반적으로 T 세포, B 세포, 비만 세포, 호염기구, 및 항원 제시 세포에서 발생한다. 억제가 FcγRIIB에 의해 매개되는 실시태양에서, 상기 억제는 일반적으로 비만 세포, 호염기구, 항원 제시 세포, 단핵구, 대식세포 및 B 세포에서 발생한다. 일부 실시태양에서, 본 발명의 이중특이적 항체는 FcεRI 수용체의 불활성화, 활성 억제 또는 발현의 하향조절에 유용하다. FcεRI이 억제되거나 하향조절되는 실시태양에서, 억제 또는 하향조절은 일반적으로 포유동물 비만 세포, 호염기구 및 항원 제시 세포에서 발생한다. 한 측면에서, 본 발명은 단리된 항-huFcγRIIB/항-huFcεRI 이중특이적 항체를 제약학상 담체 중에 포함하는 조성물을 포함한다. 다른 실시태양에서, 본 발명은 단리된 항-huFcγRIIB/항-huFcεRI 이중특이적 항체 및 단리된 항-IgE 항체를 포함하는 조성물을 포함한다. 조합 조성물 내의 항-huFcγRIIB/항-huFcεRI 이중특이적 항체 대 항-IgE 항체의 유용한 비율은 각각의 환자에 대해 용이하게 결정된다. 비율은 일반적으로 약 0.01:1 내지 100:1이다. 조성물의 항체는 모노클로날, 인간, 인간화 또는 키메릭 항체일 수 있다. 다른 측면에서, 본 발명은 항-huFcγRIIB/항-huFcεRI 이중특이적 항체를 투여함으로써 포유동물의 면역 질환을 치료하는 치료 방법을 포함한다. 한 실시태양에서, 포유동물은 인간 환자, 예를 들어 알레르기 질환, 천식 및(또는) 염증 치료를 필요로 하는 인간 환자이다. 다른 실시태양에서, 치료 방법은 본 발명의 항-huFcγRIIB/항-huFcεRI 이중특이적 항체를 면역 질환, 알레르기, 천식에 걸렸거나, 히스타민 방출 억제를 필요로 하는 포유동물에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 또다른 실시태양에서, 본 발명의 항-huFcγRIIB/항-huFcεRI 이중특이적 항체는 항-IgE 항체와 조합되어 별개로 또는 동시에 투여된다. 한 실시태양에서, 항-IgE 항체는 모노클로날 항체이다. 추가의 실시태양에서, 항-IgE 항체는 졸레어 (Xolair)(등록상표)이다. 또다른 실시태양에서, 이중특이적 항체는 진행중인 면역 질환에 대한 치료적 처리의 일부 (예를 들어 동일한 치료 요법의 일부)로서 항-IgE 항체와 조합되어 투여되고, 여기서 이중특이적 항체는 항-IgE 항체와 별개로 (동시 투여가 아니라) 투여된다. 다른 실시태양에서, 본 발명의 이중특이적 항체 및 항-IgE 항체는 동시에 투여된다. 조합 투여에서 항-huFcγRIIB/항-huFcεRI 이중특이적 항체 대 항-IgE 항체의 유용한 비율은 (투여가 별개로 투여되는지 또는 동시에 투여되는지에 상관없이) 각각의 환자에 대해 용이하게 결정된다. 본 발명의 목적을 위해, 비율은 약 0.01:1 내지 100:1 및 환자에 대해 결정된 범위 내의 임의의 유용한 비율이다. 유용한 비율은 예를 들어 0.05:1, 0.1:1, 0.5:1, 1:1, 1:0.5, 1:0.1 및 1:0.05일 수 있지만, 표준 임상 기술에 의해 결정될 수 있는 어떠한 유용한 비율도 배제되지 않는다. 본 발명은 추가로 항체를 코딩하는 단리된 핵산, 상기 핵산을 포함하는 벡터 또는 숙주 세포, 및 숙주 세포를 배양하고, 임의로 숙주 세포 배양액으로부터 (예를 들어 숙주 세포 숙주 세포 배양 배지로부터) 항체를 회수하는 것을 추가로 포함하는, 항체의 제조 방법을 제공한다.