투석 여과 방법 document_id A220623052929

투석 여과(diafiltration)는 작동 모드에 따라 완충액 교환 및 생성물 회수를 위해 생물공학적 적용에 사용된다. 투석 여과에서, 완충액은 여액을 시스템으로부터 제거하면서 재순환 또는 보유액 탱크로 도입된다. 투석 여과는 생성물인 보유액을 세척하는 방법으로서 사용되거나 수거를 위해 여과 시스템을 통해 생성물을 세척하기 위해 사용될 수 있다. 투석 여과를 사용하는 미세여과 수거 공정의 목적은 공정 스트림으로부터 생성물의 회수를 최대화하는 것이다. 요약 본 발명은 비이온성 계면활성제, 예를 들면, 플루로닉(Pluronic ) F68, 폴리에틸렌 글리콜 또는 기타 비이온성 블럭 공중합체 계면활성제를 미세여과 공정[예: 접선 유동 여과(tangential flow filtration; TFF)]의 일부로서 투석 여과 단계에 사용된 완충액에 첨가하면 공정 유체의 혼탁도를 감소시킬 수 있다는 발견에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 투석 여과 방법을 포함한다. 본 발명의 방법은 투석 여과용 보유액을 제공하는 단계 및 비이온성 계면활성제를 상기 보유액에 첨가하는 단계를 포함한다. 비이온성 계면활성제는, 예를 들면, 플루로닉(Pluronic ) F68 또는 폴리비닐 알코올(PVA)일 수 있다. 몇몇 양태에서, 비이온성 계면활성제는 완충액, 예를 들면, 인산염 완충된 염수(PBS) 중에 존재한다. 완충액 중의 비이온성 계면활성제의 농도는 0.2 내지 4g/ℓ, 0.2 내지 3g/ℓ, 0.5 내지 2.5g/ℓ, 0.5 내지 2g/ℓ, 및 0.5 내지 1.5g/ℓ일 수 있다. 몇몇 양태에서, 완충액 중의 비이온성 계면활성제의 농도는 약 1g/ℓ 또는 2.5g/ℓ이다. 특정 양태에서, 보유액은 세포 및 배양 배지를 포함한다. 본 발명의 특정 측면에서, 투석 여과로부터의 여액의 혼탁도는 비이온성 계면활성제의 부재하에 수행되는 투석 여과와 비교하여 감소된다. 다른 양태에서, 비이온성 계면활성제의 존재하에 보유액으로부터의 생성물의 회수는 비이온성 계면활성제의 부재하에 생성물의 회수와 비교하여 증가한다. 다른 양태에서, 보유액은 약제학적 생성물, 예를 들면, 재조합 단백질, 재조합 펩타이드, 또는 천연 단백질 또는 펩타이드를 포함한다. 몇몇 경우에서, 보유액은 보유액 중의 세포에 등장성인 완충액, 예를 들면, PBS를 포함한다. 다른 양태에서, 투석 여과는 약 20 내지 25℃, 2 내지 37℃, 또는 2 내지 25℃의 온도에서 수행된다. 투석 여과는, 예를 들면, 불연속 투석 여과 또는 일정 용적 투석 여과일 수 있다. 특정 경우에서, 비이온성 계면활성제의 농도는 투석 여과 동안 사실상 변하지 않는다. 비이온성 계면활성제는 세포 배양 배지 중에 존재할 수 있다. 또한, 본 발명은 방법, 예를 들면, 본원에 기술된 투석 여과를 사용하여 제조된 생성물에 관한 것이다. 다른 측면에서, 본 발명은 약 1g/ℓ의 비이온성 계면활성제[예: 플루로닉(Pluronic ) F68 또는 PVA] 농도를 유지시킴을 포함하는, 투석 여과 방법에 관한 것이다. 다른 측면에서, 본 발명은 비이온성 계면활성제 약 1g/ℓ[예: 플루로닉(Pluronic ) F68] 또는 2.5g/ℓ(예: PVA)를 포함하는 투석 여과용 조성물에 관한 것이다. 또한, 조성물은 등장성 완충액, 예를 들면, PBS를 포함할 수 있다. 달리 정의하지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 분야의 숙련가에게 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기술된 방법 및 재료와 동일하거나 유사한 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있으나, 적합한 방법 및 재료는 이하 기술된다. 본원에서 언급된 모든 공보, 특허원, 특허 및 기타 참조문헌은 이의 전체 내용이 참조문헌으로 인용된다. 또한, 재료, 방법 및 예는 단지 예시적인 것이며 이로 한정하고자 하는 것은 아니다. 발명의 기타 특징 및 이점은 상세한 설명, 도면 및 특허청구범위로부터 명백할 것이다.