ＮＫＧ2Ａ에 대한 단클론 항체 document_id A220623053001

자가면역반응의 유발 없이 효과적인 면역감시(immune surveillance)를 유지하기 위해서는 효과 T 세포(effector T cell)의 정확한 역가 측정이 요구된다. 자가면역질환은 면역 시스템이 자가-항원(Ludewig 등. (1999) Immunol Rev. 169:45-54 참조)에 대하여 면역반응을 일으킬 때 유발된다. 자가면역반응의 유발과 유지에 관련된 기전은 명확하진 않지만, 이전 면역적으로 무시된 항원의 2차 림프 기관에의 출현이 관련된 것으로 보인다. 수지상 세포(DC)는 골수 유래의 항원제시세포(APCs)이며, 이는 면역 반응에서 중요한 역할을 한다(O'Neill 등. (2004) Blood 104:2235-2246 참조). DC는 포식작용, 세포내 이입 및 음세포작용 등을 통하여 박테리아, 바이러스, 죽어가는 세포 및 다양한 복합체 분자들을 내재화한다. 함입된 단백질은 펩타이드로 분해되고, 이후 이들은 MHC 클래스 I 및 클래스 II 분자들과 함께 DC 세포 표면에 제시된다. MHC 클래스 I 분자에 로딩된 항원은 통상 내재성 단백질 유래이며, CD8+ T 세포에 의하여 인식되는 반면, 클래스 II 분자에 로딩된 항원은 통상 외인성 단백질 유래이며 CD4+ T 세포에 의하여 인식된다. 항원 포착후, 미성숙 DC 세포는 성숙 DC세포로 되며, 성숙 DC세포는 포식작용의 감소를 나타내며, 림프 조직으로 이동하고, 증강된 T 세포 자극능을 가진다. 림프 조직에서, DC는 미경험 T 세포(naive T cell)을 초회 감작하고, 그 클론 확장 및 분화를 자극하며, 또한 B 세포와 NK 세포 등을 포함하는 내재면역시스템의 세포들과 상호작용할 수 있다. 활성화된 NK 세포는 성숙 DC 세포가 아닌 미성숙 DC 세포를 살해할 수 있다. 항원 전달 및 T 림프구의 초기 감작은 주로 항원제시 수지상세포에 의하여 매개 되기 때문에, 수지상 세포에 의한 부적절한 자가항원의 제시는 적어도 자가면역질환의 일부분으로 작용할 것이다. 자연살해(NK)세포는 비양식화된 면역(non-conventional immunity)에 관여하는 하위 집단의 림프구이다. NK 세포는 효과적인 면역감시기전을 제공하며, 이로써 종양이나 바이러스에 감염된 세포와 같은 바람직하지 못한 세포들이 제거될 수 있다. NK 세포의 활성은 활성시그널 및 억제시그널 양자가 관련하는 복잡한 기전에 의하여 조절된다(Moretta 등. (2001) Annu Rev Immunol 19:197-223; Moretta 등. (2003) EMBO J EPub Dec 18; Ravetch 등. (2000) Science 290:84-89; Zambello 등. (2003) Blood 102:1797-805; Moretta 등. (1997) Curr Opin Immunol 9:694-701 참조; 이상의 문헌에 개시된 모든 내용은 본 출원에 참조로 포함된다). 수개의 구별되는 NK-특이적 수용체가 동정 되었으며, 이들은 NK 세포 매개 인식 및 HLA 클래스 I 결핍 표적 세포의 살해에 중요한 역할을 한다. NKp30, NKp46 및 NKp44로 명명되는 이들 수용체들은 Ig 슈퍼패밀리의 일원이다. 특정 mAbs에 의해 유도되는 이들의 교차결합은 세포내 Ca++ 수준의 증가, 세포독성의 유발 및 림포카인의 방출을 일으키는 강력한 NK 세포 활성화를 초래한다. 특히, mAbs-매개 NKp30, NKp46 및/또는 NKp44 의 활성화는 다양한 형태의 표적 세포에 대해 NK 세포독성의 활성화를 결과한다. 이러한 발견은 자연 세포독성에 있어 이들 수용체가 중요한 역할을 하는 것을 입증한다. NK 세포는 주조직적합복합체(major histocompatibility complex; MHC) 클래스 I-특이적 억제성 수용체에 의하여 음성적으로 조절된다(Karre 등. (1986) Nature 319:675-8; Ohlen 등, (1989) Science 246:666-8 참조). 이들 특이적 수용체는 주조직적합복합체(MHC) 클래스 I 분자 또는 HLA의 다형성 결정자(polymorphic determinants)에 결합하고 NK 세포 용해를 억제한다. 사람의 경우, 킬러 Ig-양 수용체(KIRs)로 명명되는 어떤 수용체 군은 HLA 클래스 I 대립자(alleles)그룹을 인식한다(Yawata 등. (2002) Crit Rev Immunol 22:463-82; Martin 등. (2000) Immunogenetics. 51:268-80; Lanier (1998) Annu Rev Immunol. 16:359-93 참조; 이상의 문헌에 개시된 모든 내용은 본 출원에 참조로 포함된다). NK 세포상의 또 다른 중요한 억제성 수용체는 CD94-NKG2A이며, 이는 비전형적 MHC 클래스 I 분자 HLA-E와 상호작용한다.(Braud 등. (1998) Nature 391:795-799; Lee 등. (1998) PNAS 95:5199-5204; Vance 등. (2002) PNAS 99:868-873; Brooks 등. (1999) J Immunol 162:305-313; Miller 등. J Immunol (2003) 171:1369-75; Brooks 등. (1997) J Exp Med 185:795-800; Van Beneden 등. (2001) 4302-4311 ; U.S. 특허출원 제20030095965호 참조; 이상의 문헌에 개시된 모든 내용은 본 출원에 참조로 포함된다). 이들 수용체중 일부는 T 세포 항원 수용체-의존적 T 세포 활성화의 역가를 조절할 수 있다. 억제성 수용체가 드물게 결핍된 경우, 활성화 아이소형(isoform)들이 T 세포 효과 기능을 확대시키고 자가면역의 병리를 구성할 수 있다. NKG2A의 아미노산 배열은 영장류를 포함하여 포유동물에 따라 다양하다. 예를 들면, 인간 및 레시우스 원숭이의 NKG2A 단백질은 리간드 결합 도메인내에서 약 86％의 상동성을 포함하여 90％이하의 상동성을 가진다. NKG2A를 조절하려는 치료적 노력, 본질적으로 염증 예방을 위한 치료적 노력들은 비전형적 MHC 클래스 I 분자들, 인간 수용체에 대한 HLA-E 및 마우스 수용체에 대한 Qa-Ib의 연구에 주로 촛점이 맞춰져 왔다. 세포 표면 발현에서, 이들 MHC 분자들은 다른 MHC 클래스 I 분자들의 시그널 펩타이드에서 유래되는 펩타이드에 우선적으로 결합한다. 다른 MHC 클래스 I 분자들의 발현은 HLA-E의 발현을 조절할 수 있고, 이로써 NK 세포가 잠재적인 표적 세포에서의 MHC 클래스 I 의존적 항원 제시경로 상태를 모니터링할 수 있게 한다. 세포 표면의 HLA-E 수준은 종양 세포 및 바이러스 감염 세포에 대한 NK 세포의 세포독성에 중요하다. HLA-E 발현 또는 기능을 조절하는 치료적 전략은 일반적으로 HLA-I 또는 HSP60 펩타이드를 사용하여 NK 세포가 활성화되지 않도록 즉 염증 예방을 위한 보호 상태를 유도하는 것이다. 미국특허공개 제20030095965호는 NKG2A, NKG2C 및 NKG2E에 결합하는 항원 3S9를 개시하고 있다. 3S9는 상기 수용체들을 교차결합시키고, 이에 수반하여 NK 세포 -매개 용해를 억제하는 것으로 주장되고 있다. 공유 국제출원 WO 2005/105849 호는 NKG2A를 포함하는 NK 수용체에 특이적으로 결합하는 항체를 NK-타입 과립림프구림프증식질환(NK-LDGL)으로 고통받는 환자의 치료에 사용하는 것을 개시하고 있다. 상기 항체들은 NK 세포 활성을 억제한다. 단클론항체가 각종 질환의 진단 및 치료에 매우 유용한 것이 입증되어 있다. 치료적 단클론항체들은 상이한 기전들을 통하여 작용한다. 리투산(Rituxan)과 같은 항체는 종양 세포와 같은 병적 세포 표면에 제시되어 있는 항원(리투산의 경우 CD20)을 인식하고, 면역 시스템으로 하여금 인식된 세포를 파괴하도록 한다. 벡사(Bexxar), 온코림(Oncolym), 또는 즈발린(Zevalin)과 같은 항체들은 방사성동위원소, 화학요법제 또는 독소(toxin)과 결합하여 상기 항체와 결합되어 있는 세포를 직접 살해하게 한다. 또한 바실리시맙(Basiliximab) 및 다클리즈맙(Daclizumab)(IL-2 차단), IgE 차단 오마리즈맙(Omalizumab) 및 에팔즈맙(efaluzimab)과 같은 항체는 특정 단백질의 활성을 차단한다. 항체 기반 치료법은 본 기술분야에서 잘 알려져 있으며 하기 문헌에서 검토된 바 있다(Gatto (2004) Curr Med Chem Anti-Cane Agents 4(5):411-4, Casadevall 등. (2004) Nat Rev Microbiol. 2(9):695-703, Hinoda 등. (2004) Cancer Sci. 95(8):621-5, Olszewski 등. (2004) Sci STKE. JuI 06(241):pe30, Coiffier (2004) Hematol J. Suppl 3 :S 154-8, Roque 등. (2004) Biotechnol Prog. 20(3):639-54 참조; 이상의 문헌에 개시된 모든 내용은 본 출원에 참조로 포함된다). 항체를 사람에게 치료적 용도로 사용하거나 또는 임상 실험에 들어가기전에, 항체는 반드시 사람이 아닌 동물에서 전임상 연구를 거쳐 그 독성, 생체내 효능, 생체이용율, 반감기 등의 다양한 파라미터와 기타 약물운동학적 및 약동학적 파라미터들을 평가하여야 한다. 이러한 검사는 통상 포유류, 바람직하게는 항체가 생물화학적 활성을 갖는 즉 mAb가 종 내 호몰로그(homolog) 분자와 반응하여 인간과 생리학적으로 가장 유사한 것으로 기대되는 포유류를 대상으로 하여 수행된다. 그러나 만약 항체가 인간 단백질에만 결합하고 그 표적 단백질의 비인간 동물의 호몰로그와는 결합하지 않는 경우, 비인간 영장류에서의 연구는 지체될 수 있다. 반면, 교차반응성이 존재하는 경우는 항체의 생체내 효능을 그 동물에서 테스트할 수 있을 뿐 아니라 부작용, 독성 또는 동력학적 성질과 같은 항체의 표적 단백질과의 결합과 관련된 다른 이슈들도 연구가능하다. 용이하게 입수가능한 영장류는 "센터 드 프리마톨로지" (CDP : ULP5 Fort Foch, 67207 Niederhausbergen, France)에서 입수가능한 시노몰거스 원숭이(Macaca mulatta), 레시우스 원숭이(Macacus mulatta), 아프라카 그린 원숭이(Chlorocebus aethiops), 마모셋(Callithrix jacchus), 사이미리(Saimiri sciureus) 및 "스테이션 드 프리마톨로지 시엔알에스"(CD56, 13790 Rousset/Arc, France)에서 입수가능한 바분 등과 같은 신세계 원숭이 및 구세계 원숭이를 포함한다. 일반적으로 후보 약물의 테스트에 침팬지와 에이프(apes)을 사용할 수 있지만, 그런 경우는 드물고 테스트할 다른 방법이 없거나 소진된 경우에만 시행된다. 항체는 그들 표적의 특정 3차원적 형태에 결합하기 때문에, 표적 단백질의 아미노산배열이 조금만 바뀌어도 결합력이 같이 소실될 수 있다. 따라서 어떤 종의 단백질과 결합하는 주어진 항체가, 그 서열 중 일부는 공유하나 완전히 동일하지는 않는 동종 단백질에도 역시 결합할 것인지 여부는 예측할 수 없게 된다. 예를 들어 인간 단백질에는 결합하는 항체가 매우 가까운 종에서의 호몰로그와는 결합하지 않는 경우가 많다. 예를 들어 인간과 레시우스 원숭이의 CD4 단백질은 거의 94％의 상동성을 나타냄에도, 어떤 인간 CD4 단백질에 대한 항체는 원숭이 호몰로그에는 결합하지 않는다(Genbank IDs GLl 16013 및 20981680; Sharma 등. (2000) JPET 293:33-41, 2000 참조, 이상의 문헌에 개시된 모든 내용은 본 출원에 참조로 포함된다). 다른 예로는 항원 개발에 대한 약학적 표적으로 광범위하게 연구되어 온 인간 CD3에 대한 수개의 항체들; 원숭이 CD3 단백질과는 상호작용하지 않는 개발에 적절한 특성을 갖는 예를 들면 UCHT2 등의 항체들을 포함한다. 많은 자가면역 질환들이 심각하고 현저한 점, 자가-항원에 대한 면역반응의 조율에 있어서의 성숙 수지상 세포의 역할을 고려할 때, 이러한 질환의 기초가 되는 수지상 세포의 수준 또는 활성을 조절하는 새롭고 효과적인 치료법이 강력하게 요구되고 있다. 또한 면역 시스템에 의한 파괴로부터 자신을 방어할 수 있는 이상 세포들(예를 들어 종양세포 또는 바이러스 감염 세포)로 특징 되는 질환에 대한 치료법이 요구되고 있다. 또한 최종적으로 NKG2A에 대한 단클론 항체의 인간에 있어서 치료적 효능을 판단할 수 있는 유효한 생체내 시험 시스템의 개발이 요구되고 있다.