푸코실-지엠1에 대한 인간 모노클론 항체 및 항-푸코실-지엠1 사용법 document_id A220623065077

푸코실-GMl은 세포막에 분자를 고정시키는 세라미드 리피드 성분과 세포 표면에 노출되어 있는 탄수화물 성분으로 구성되어 있는 스핑고리피드 모노시알로강리오시드(sphingolipid monosialoganglioside)이다. 탄수화물 항원은 암의 세포 표면상에 가장 많이 발현되는 항원이다 (Feizi T. (1985) Nature 314:53-7). 예컨대 작은 세포 폐암 (SCLC)과 같은, 몇몇 종양 유형에서, 초기에는 화학요법이 효과적이지만 나중에는 화학요법에 반응하지 않고 빠르게 재발한다. 새로운 면역제 치료법을 사용하는 것이 약물 저항 재발을 극복하는데 성공을 거둘 수 있다 (Johnson DH. (1995) Lung Cancer 12 Suppl 3:S71- 5). 강리오시드 GD3 및 GD2과 같은 여러 탄수화물 항원들은 MAbs를 사용하는 수동적인 면역요법의 효과적인 표적으로 작용한 것으로 나타났다 (Irie RF and Morton DL. (1986) PNAS 83:8694-8698; Houghton AN et al. (1985) PNAS 82:1242-1246). 또한 강리오시드 항원들은 임상 실험에서 백신을 사용하는 적극적인 면역요법의 효과적인 표적으로도 기술되어 왔다. (Krug LM et al. (2004) Clinical Cancer Research 10:6094-6100; Dickler MN et al. (1999) Clinical Cancer Research 5;2773-2779; Livingston PO et al. (1994) J Clin Oncol.12: 1036-44). 실제로, 푸코실-GM1에 이어서 KLH 접합 항원을 사용한 백신접종으로 항체 적정량이 발달된 SCLC 환자로부터 얻은 혈청에서 종양 세포에 대한 특이적 결합 및 종양 특이적 상보체 의존 독성이 (CDC)이 설명되었다. 항-푸코실-GMl 적정량과 연관된 독성은 약하고 일시적이며 제한된 상태의 SCLC를 갖는 세 명의 환자는 18, 24, 및 30개월에 재발되지 않았다 (Krug et al., supra; Dickler et al, supra). 푸코실-GMl 발현은 높은 퍼센트의 SCLC 경우에 나타났고 다른 강리오시드 항원과는 달리, 푸코실-GMl은 정상 조직에서는 거의 또는 전혀 발현되지 않았다 (Nilsson et al. (1984) Glycoconjugate Jl:43-9; Krug et al, supra; Brezicka et al. (1989) Cancer Res 49:1300-5; Zhangyi et al. (1997) Int J Cancer 73:42-49; Brezicka et al (2000) Lung Cancer 28:29-36; Fredman et al. (1986) Biochim BiophysActa 875: 316-23; Brezicka et al. (1991) APMIS 99:797-802; Nilsson et al. (1986) Cancer Res 46:1403-7). 푸코실-GMl은 SCLC 세포주의 배양 배지, 털없는 쥐 이종이식편의 혈청 및 종양 추출물, 많이 진행된 질병 단계의 SCLC 환자의 혈청에 존재했다. (Vangsted et al. (1991) Cancer Res 51:2879-84; Vangsted et al. (1994) Cancer Detect Prev 18:221-9). 이러한 보고는 푸코실-GMl이 높은 특이성의 종양 항원이라는 확실한 증거를 제공하며 이는 면역치료학의 표적이 될 수 있다. 따라서, 푸코실-GMl을 인식하는 시약 및 그러한 시약을 사용하는 방법들이 바람직하다. 요약 본 명세서는 푸코실-GM1에 결합하고 여러 바람직한 성질들을 나타내는 분리된 모노클론 항체, 특히 인간 모노클론 항체를 제공한다. 바람직한 성질들에는 인간의 작은 세포 폐암 세포주 DMS-79(인간 SCLC ATCC # CRL-2049) 및 푸코실-GM1에 대한 높은 친화력 결합이 포함된다. 또한 본 명세서의 항체 및 조성물을 사용하여 다양한 푸코실-GM1 매개 질병들의 치료법도 제공하였다. 일면으로, 본 명세서는 항체가 (a)푸코실-GM1에 특이적으로 결합하고 (b)인간의 작은 세포 폐암 세포주 DMS-79(인간 SCLC ATCC # CRL-2049)에 결합하는 분리된 모노클론 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다: 대안적인 구체예에서 항체가 쥐의 항체, 불명의 항체 또는 인간화된 항체일 수 있으나, 바람직하게는 항체는 인간 항체이다. 다른 구체예에서, 본 명세서는 항체가 참고 항체와 푸코실-GM1에 결합하는 것을 상호-경쟁하고, 참고 항체가 (a)푸코실-GM1에 특이적으로 결합하고 (b)인간의 작은 세포 폐암 세포주 DMS-79(인간 SCLC ATCC # CRL-2049)에 결합하는, 분리된 모노클론 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 제공한다. 어떤 구체예에서, 참고 항체는 (a) SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 포함하는 중 사슬 가변 지역 ; 및 (b) SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하는 경 사슬 가변 지역을 포함한다. 다른 구체예에서, 참고 항체는 (a) SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하는 중 사슬 가변 지역 ; 및 (b) SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함하는 경 사슬 가변 지역을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 참고 항체는 (a) SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함하는 중 사슬 가변 지역 ; 및 (b) SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 경 사슬 가변 지역을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 참고 항체는 (a) SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 중 사슬 가변 지역 ; 및 (b) SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는 경 사슬 가변 지역을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 참고 항체는 (a) SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 포함하는 중 사슬 가변 지역 ; 및 (b) SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 경 사슬 가변 지역을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 참고 항체는 (a) SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하는 중 사슬 가변 지역 ; 및 (b) SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 경 사슬 가변 지역을 포함한다. 일면으로, 본 명세서는 항체가 (a)푸코실-GM1에 특이적으로 결합하고, 인간 VH 3-48 유전자의 생성물 또는 그로부터 유도된 중 사슬 가변 지역을 포함하는, 분리된 모노클론 항체 또는 그의 항원 결합 부분에 관한 것이다. 더욱이 본 명세서는 항체가 (a)푸코실-GM1에 특이적으로 결합하고, 인간 VK L15 유전자의 생성물 또는 그로부터 유도된 경 사슬 가변 지역을 포함하는, 분리된 모노클론 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 제공한다. 한 바람직한 조합은 (a) SEQ ID NO: 13을 포함하는 중 사슬 가변 지역 CDR1; (b) SEQ ID NO: 19를 포함하는 중 사슬 가변 지역 CDR2; (c) SEQ ID NO: 25를 포함하는 중 사슬 가변 지역 CDR3; (d) SEQ ID NO: 31을 포함하는 경 사슬 가변 지역 CDR1; (e) SEQ ID NO: 37을 포함하는 경 사슬 가변 지역 CDR2; 및 (f) SEQ ID NO: 43을 포함하는 경 사슬 가변 지역 CDR3을 포함한다. 다른 바람직한 조합은 (a) SEQ ID NO: 14을 포함하는 중 사슬 가변 지역 CDR1; (b) SEQ ID NO: 20를 포함하는 중 사슬 가변 지역 CDR2; (c) SEQ ID NO: 26를 포함하는 중 사슬 가변 지역 CDR3; (d) SEQ ID NO: 32을 포함하는 경 사슬 가변 지역 CDR1; (e) SEQ ID NO: 38을 포함하는 경 사슬 가변 지역 CDR2; 및 (f) SEQ ID NO: 44을 포함하는 경 사슬 가변 지역 CDR3을 포함한다. 다른 바람직한 조합은 (a) SEQ ID NO: 15을 포함하는 중 사슬 가변 지역 CDR1; (b) SEQ ID NO: 21를 포함하는 중 사슬 가변 지역 CDR2; (c) SEQ ID NO: 27를 포함하는 중 사슬 가변 지역 CDR3; (d) SEQ ID NO: 33을 포함하는 경 사슬 가변 지역 CDR1; (e) SEQ ID NO: 39을 포함하는 경 사슬 가변 지역 CDR2; 및 (f) SEQ ID NO: 45을 포함하는 경 사슬 가변 지역 CDR3을 포함한다. 다른 바람직한 조합은 (a) SEQ ID NO: 16을 포함하는 중 사슬 가변 지역 CDR1; (b) SEQ ID NO: 22를 포함하는 중 사슬 가변 지역 CDR2; (c) SEQ ID NO: 28를 포함하는 중 사슬 가변 지역 CDR3; (d) SEQ ID NO: 34을 포함하는 경 사슬 가변 지역 CDR1; (e) SEQ ID NO: 40을 포함하는 경 사슬 가변 지역 CDR2; 및 (f) SEQ ID NO: 46을 포함하는 경 사슬 가변 지역 CDR3을 포함한다. 다른 바람직한 조합은 (a) SEQ ID NO: 17을 포함하는 중 사슬 가변 지역 CDR1; (b) SEQ ID NO: 23를 포함하는 중 사슬 가변 지역 CDR2; (c) SEQ ID NO: 29를 포함하는 중 사슬 가변 지역 CDR3; (d) SEQ ID NO: 35을 포함하는 경 사슬 가변 지역 CDR1; (e) SEQ ID NO: 41을 포함하는 경 사슬 가변 지역 CDR2; 및 (f) SEQ ID NO: 47을 포함하는 경 사슬 가변 지역 CDR3을 포함한다. 다른 바람직한 조합은 (a) SEQ ID NO: 18을 포함하는 중 사슬 가변 지역 CDR1; (b) SEQ ID NO: 24를 포함하는 중 사슬 가변 지역 CDR2; (c) SEQ ID NO: 30를 포함하는 중 사슬 가변 지역 CDR3; (d) SEQ ID NO: 36을 포함하는 경 사슬 가변 지역 CDR1; (e) SEQ ID NO: 42을 포함하는 경 사슬 가변 지역 CDR2; 및 (f) SEQ ID NO: 48을 포함하는 경 사슬 가변 지역 CDR3을 포함한다. 본 명세서의 다른 바람직한 항체들 또는 그의 항원 결합 부분은: (a) SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 포함하는 중 사슬 가변 지역; 및 (b) SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하는 경 사슬 가변 지역;을 포함한다. 다른 바람직한 조합은 (a) SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하는 중 사슬 가변 지역; 및 (b) SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함하는 경 사슬 가변 지역;을 포함한다. 다른 바람직한 조합은 (a) SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함하는 중 사슬 가변 지역; 및 (b) SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 경 사슬 가변 지역;을 포함한다. 다른 바람직한 조합은 (a) SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 중 사슬 가변 지역; 및 (b) SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는 경 사슬 가변 지역;을 포함한다. 다른 바람직한 조합은 (a) SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 포함하는 중 사슬 가변 지역; 및 (b) SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 경 사슬 가변 지역;을 포함한다. 다른 바람직한 조합은 (a) SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하는 중 사슬 가변 지역; 및 (b) SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 경 사슬 가변 지역;을 포함한다. 본 명세서의 항체는 예를 들면, IgG1 또는 IgG4 아이소타입의 예를 들면, 전-길이 항체일 수 있다. 대안으로 이 항체들은 단일 사슬 항체 또는 Fab 또는 Fab'2단편과 같은 항체 단편일 수 있다. 본 명세서는 또한 세포독소 또는 방사성 동위원소와 같은 치료제에 결합된, 본 명세서의 항체, 또는 그의 항원-결합 부분을 포함하는 면역접합체를 제공한다. 본 명세서는 또한 상기 항체 또는 그의 항원 결합 부분과는 다른 결합 특이성을 갖는 제2의 기능 부분에 결합되는, 본 명세서의 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 포함하는 이중특이성 분자를 제공한다. 본 명세서의 항체 또는 그의 항원 결합 부분, 또는 면역접합체 또는 이중특이성 분자 및 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물도 제공된다. 본 명세서의 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 암호화하는 핵산 분자뿐만 아니라 그러한 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터 및 그러한 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포도 또한 본 명세서에 포함된다. 더욱이 본 명세서는 인간 면역글로불린 중 및 경 사슬 이식유전자를 포함하고, 본 명세서의 항체를 발현하는 유전자 이식 쥐뿐만 아니라 그러한 쥐로부터 제조되며, 본 명세서의 항체를 생산하는 하이브리도마를 제공한다. 또 다른 면으로, 본 명세서는 질병을 치료하거나 예방하기에 효과적인 양으로 본 명세서의 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 환자에 투여하는 것을 포함하는, 푸코실-GM1을 발현시키는 종양 세포의 성장을 특징으로 하는 질병의 치료법 또는 예방법을 제공한다. 질병은 예컨대, 암, 예를 들면, 폐암(작은 세포 폐암 포함)일 수 있다. 한 바람직한 구체예에서, 본 명세서는 항-푸코실-GM1 항체를 사용하는 생체내 암 치료방법을 제공한다. 항-푸코실-GM1 항체는 쥐의, 불명의, 인간화된, 또는 인간 항체일 수 있다. 본 명세서의 방법을 사용하여 치료될 수 있는 다른 암들의 예에는 작은 세포 폐암 및 작지 않은 세포 폐암을 포함하는 폐암, 신장암(예를 들면, 신장 세포 악성 종양), 아교모세포종, 뇌종양, 급성 림프구 백혈병(ALL)을 포함하는 만성 또는 급성 백혈병, 성인 T-세포 백혈병(T-ALL), 만성 골수 백혈병, 급성 면역모세포 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 림프종(예를 들면, 호지킨 및 비호지킨 림프종, 림프구 림프종, 일차 CNS 림프종, T-세포 림프종, 불키트(Burkitt's) 림프종, 미분화 거대-세포 림프종(ALCL), 피부 T-세포 림프종, 마디 소 절개-세포 림프종, 말초 T-세포 림프종, 렌넬트(Lennert's) 림프종, 면역모세포 림프종, T-세포 백혈병/림프종(ATLL), 중심모세포/중심세포(cb/cc) 여포 림프종 종양, B 계통의 미만성대세포 림프종, 혈관면역모세포 림프절증 (AILD)-유사 T 세포 림프종, 및 HIV 관련 체강 기초 림프종), 배아 악성종양, 코-인두의 미분화 악성종양, (예를 들면, 쉬민케(Schminke) 종양), 캐슬만(Castleman) 병, 카포시(Kaposi) 육종, 다중 골수종, 왈덴스트롬(Waldenstrom's) 마크로글로불린혈증, 및 다른 B-세포 림프종, 나소파란겔(nasopharangeal) 악성종양, 뼈암, 피부암, 머리 또는 목의 암, 피네 또는 눈 속 악성 흑색종, 자궁암, 직장암, 항문지역암, 위암, 고환암, 자궁암, 자궁관의 악성종양, 자궁내막의 악성종양, 자궁경부의 악성종양, 질의 악성종양, 음문의 악성종양, 식도암, 소장암, 내분비계의 암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직의 육종, 요도암, 음경암, 소아 고형종양, 방광암, 신장 또는 요관의 암, 신장골반의 악성종양, 중앙신경계(CNS)의 종양, 종양혈관형성, 제 2 척추골 종양, 뇌관신경교종, 뇌하수체 선종, 유사표피암, 편평세포 암, 석면에 의해 유도된 것들을 포함하는 환경에 의해 유도된 암, 예를 들면 메소텔리오마(mesothelioma) 및 상기 암들의 조합이 있다. 본 명세서의 다른 특징 및 장점들은 제한하는 것으로 해석되지 않는 다음의 상세한 설명과 실시예로 분명해질 것이다. 본 출원에 인용된 모든 참고자료, 겐뱅크 기탁물, 특허 및 공개된 특허 출원의 내용은 참고로 여기에 밝히 포함시킨다.