다제 내성 포도상구균의 이뮤노크로마토그래피 검출법 및 진단 키트 document_id A220623065312

포도상구균속에는 40 이상의 균종이 포함되지만, 임상적으로는 황색 포도상구균(Staphylococcus aureus)와 코아귤라제 음성 포도상구균(Coagulase-negative staphylococci)(이하 CNS라 함)으로 크게 구별된다. 황색 포도상구균은 병원균으로서, CNS는 비병원성균으로서 취급되고 있다. 감염증 치료에는 항생 물질이 이용되지만, 포도상구균은 약제 내성을 갖는 주가 대부분이고, 임상적 견지에서 내성 유무에 의해서 분류된다. 병원성균으로서 임상적으로 중요한 황색 포도상구균 중, 메티실린 내성 황색 포도상구균(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus)(MRSA)은 메티실린 등의 페니실린제를 비롯한 β 락탐제에 내성을 나타내는 황색 포도상구균이지만, 동시에 아미노산 배당체, 매크로라이드제 등의 많은 약제에 내성을 나타내는 것이 대부분이고, 그 때문에 임상상으로는 다제 내성 황색 포도상구균(Multi-drug resistant Staphylococcus aureus)으로서 취급된다. 한편 메티실린에 감수성을 나타내는 황색 포도상구균은 메티실린 감수성 황색 포도상구균(Methcillin-sensitive Staphylococcus aureus)(이하 MSSA)이라 불린다. 황색 포도상구균은 엔테로톡신, 독소성 쇼크 증후군 독소, 용혈소, 표피 박탈 독소를 비롯한 다양한 독소를 생산하고(비특허 문헌 1), 그의 감염에 의해서 장염, 폐렴, 피부염, 장기 부전 등을 발증시키고, 심한 경우에는 죽음에 이르게 되는 경우도 있다. 따라서 환자로부터 황색 포도상구균이 분리된 경우, MRSA인가 아닌가를 한시라도 빨리 알아, MRSA 감염증인 경우에는 MRSA에 효과적인 반코마이신, 황산아르베카신 등의 적절한 약제를 선택, 투여하는 것이 필요하다. 한편, 황색 포도상구균 이외의 포도상구균은 상재(常在) 세균이고, 통상은 정상인에 대하여 비병원성이다. 그러나, 장기 이식환자의 수술 후의 감염증 대책 등으로서 면역 억제제를 사용한 경우, 또는 노화에 따른 체력 감쇠 등의 요인에 의해 면역력이 저하된 소위 감염 용이성 환자는 일화견(日和見) 감염을 일으키는 경우가 있다. 황색 포도상구균 이외의 포도상구균에 있어서도 메티실린 내성이나 다제 내성을 획득한 것이 있고, 이들은 각각 메티실린 내성 코아귤라제 음성 포도상구균(Methicillin-resistant Coagulase-negative staphylococci)(이하 MRCNS) 또는 다제 내성 코아귤라제 음성 포도상구균(Multi-drug resistant Coagulase-negative staphylococci)라 총칭된다. MRSA와 동일하게 MRCNS는 감염되기 쉬운 사람에게 감염된 경우에는 치료에 효과적인 약제가 한정되기 때문에 의학상 문제가 되었다. 이들 MRSA와 MRCNS는 둘다 모두 다제 내성 포도상구균이라 총칭된다. MRSA, MRCNS의 약제 내성의 본질은, 포도상구균의 세포벽의 구성 성분인 뮤레인을 가교하여 세포벽을 합성하는 효소인 4종류의 페니실린 결합 단백(PBP1, PBP2, PBP3, PBP4)에 새로운 효소로서 PBP2'의 발현에 의한 것으로 알려져 있다(비특허 문헌 2). 포도상구균이 공통적으로 보유하는 PBP1 내지 4는 세포벽 합성 효소로서 기질 아날로그인 페니실린계 항생 물질에 의해 불활성화되고, 균은 세포벽 합성 불능이 됨으로써 이윽고 사멸된다. 그러나 MRSA, MRCNS는 β 락탐계 항생 물질에 대하여 친화성이 낮은, 즉 불활성화되지 않는 새로운 세포벽 합성 효소 PBP2'를 발현하고, 세포벽 합성의 역할을 대체함으로써 계속 증식하는 것이 가능해진다고 생각되었다. MRSA, MRCNS는 다른 항생 물질에 대한 내성 기구도 획득하여 많은 항생 물질에 내성이 되는 다제 내성이 대부분이다. 이들은 단순히 β 락탐계 항생 물질에 내성을 갖는 포도상구균으로서가 아니라, 다제 내성의 포도상구균으로서 취급된다. 일반적인 포도상구균의 분리법ㆍ판정법은, 비강 스와브, 인두 스와브, 객담, 혈액, 고름, 분변(糞便) 등을 임상 검체로 하고, 한천 배지나 액체 한천 배지를 이용한 분리 배양을 행한다. 한천 배지를 이용하여 배양된 경우에는, 발육한 콜로니 중 포도상구균이 의심되는 콜로니를 추가로 순배양하고, 그람 염색에 의한 염색상의 검경, 코아귤라제 생산능, 만니트 분해능 등의 생화학적 성상 시험 등에 의해 포도상구균 또는 황색 포도상구균의 동정을 행한다. 액체 배지에서 배양된 경우에는, 콜로니 단리를 위해 배양액을 한천 배지에 접종하여 배양하고, 동일하게 포도상구균이 의심되는 콜로니에 대하여 순배양 후, 동정을 행한다. 황색 포도상구균 또는 포도상구균이라고 동정된 균은 약제 감수성 시험 등에 사용되고, 그 시험 결과로부터 MRSA인가 MSSA, 또는 MRCNS인가 아닌가의 판정이 행해진다. 약제 감수성 시험에는, 희석법, 디스크 감수성 시험 등의 배양에 의한 시험 방법이 일반적으로 이용되고 있다. 이들 약제 감수성 시험은 배양 시간이 16 시간 내지 24 시간 필요한 것(분리 배양, 순배양에 따르면 임상 검체의 분리부터 판정까지 3 일 이상 소요됨), 이 약제 감수성 시험에서는 접종균 농도, 배양 온도, 배지 조성 또는 사용되는 약제 등에 의해서 시험 성적에 차이가 있는 것으로 알려져 있고, 수기적(手技的)으로도 숙련이 필요하다. 최근 순배양, 분리 배양, 또는 임상 검체로부터 직접 약제 내성 기구의 본체인 PBP2'를 코딩하는 mecA 유전자를 PCR법에 의해서 검출하고, 피검균주에서의 mecA 유전자의 보유 상황으로써 항생 물질 내성의 감별을 행하는 방법이 개발되었다. 그러나, mecA 유전자의 보유는 반드시 항생 물질 내성의 발현을 나타내는 것으로 한정되지는 않고, 유전자를 보유하고 있음에도 불구하고 내성을 획득하지 못한 주가 존재한다. 한편, PBP2'의 생산이 다제 내성을 발현하는 데 있어서 중요한 역할을 담당하는 것은 상술한 바와 같고, 포도상구균으로부터 PBP2'를 검출하는 것은 그 주의 내성 획득 여부를 아는 유용한 수단이 될 수 있다. MRSA를 비롯한 다제 내성 포도상구균속균이 특이적으로 생산하는 PBP2'를 항원 항체 반응에 기초하는 면역학적 수단에 의해서 검출하고자 하는 방법으로서는, 웨스턴 블롯법, 방사 면역 측정법, 슬라이드 라텍스 응집법이 알려져 있다(특허 문헌 1 참조). 그러나, 이들 PBP2'의 검출법에는 이하의 문제점이 있다. 웨스턴 블롯법은, 방법 그 자체가 번잡하여 신속하게 다수 검체를 처리하는 것은 곤란하다. 방사 면역 측정법은 방사성 동위체를 사용하는 것, 측정법 조작 중에서 항원 항체 복합체와 그 이외의 비결합 항원 또는 항체를 분리하는 BF 분리의 조작이 필요한 것, 균체로부터의 항원 추출에 사용된 변성제가 반응계에 존재함으로써 측정 시간에 수시간이 소요되는 것 등 일상 검사의 관점에서 실용적이지 않다. 슬라이드 라텍스 응집법은, 협잡균으로 인한 위양성(false positive)(예를 들면, 비특이 반응에 의한 위양성)과 저감도 때문에 순배양균에서의 검출이 요구되므로, 분리 배양, 순배양의 최저 2회의 배양 조작이 불가결해져 판정까지는 검체 채취로부터 2 일 내지 3 일이 소요되는 것, 순배양의 배지대로서 비용이 높아지는 것, 판정 시간은 3 분으로 짧지만 판정 시간을 초과하면 응집이 진행되기 때문에 위양성이 일어날 가능성이 있는 것, 균체로부터 PBP2'를 추출하는 전처리에 있어서 PBP2'를 포함하는 상청과 세포벽 유래의 파편을 분리하기 위해서 원심 조작이 요구되기 때문에 시간이 걸리며 검사실의 환경 오염이 문제가 되는 것, 피펫 조작에 의해 원심 후의 상청을 옮기는 등의 번잡한 조작을 수반하는 것, 비등 처리를 수반하는 것 등의 문제가 있다. 따라서 이들 검사를 대신하는, 다제 내성 포도상구균속균이 특이적으로 생산하는 PBP2'를 특이적으로 양호한 감도로 신속하게 검출할 수 있는 검사 방법이 요망되었다. [특허 문헌 1] 일본 특허 제3638731호 공보 [비특허 문헌 1] 이가라시 히데오: TSST-1, 침습과 면역, 3, 3-10(1994) [비특허 문헌 2] Utsui, Y., and Yokota, T.: Role of an altered penicillin-binding protein in methicillin-and cephem-resistant Staphyloccus aureus., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 28, 397-403 (1985)