조성물 및 조성물의 제조 방법 document_id A220623065411

면역글로불린 슈퍼패밀리의 일원인 세포독성 T 림프구 항원 4 (CTLA4)는 활성화 T 세포에 의해 발현된 분자이다. CTLA4는 T-세포 공동자극 분자 CD28과 유사하고, 두 분자 모두 항원-제시 세포 (APC) 상에서 B7-1 (CD80) 및 B7-2 (CD86)에 결합한다. 그러나, CTLA4는 T 세포에 억제 신호를 전달하는 반면에, CD28은 자극 신호를 전달한다. CTLA4-Ig 분자는 세포독성 T 림프구 항원 4 (CTLA4)의 리간드-결합 도메인과 면역글로불린 (Ig) 중쇄 불변 영역의 융합 단백질이다. 이들 가용성 분자는 다양한 항원-제시 세포 (APC)의 표면 상에서 B7 항원 (CD80 및 CD86)에 결합하고, 따라서 T-세포의 표면 상에서의 B7-1 및 B7-2와 CD28의 기능적 상호작용을 차단함으로써 그의 생리학적 작용을 발휘한다. 이러한 차단은 T-세포 활성화의 억제, 및 따라서 면역 반응의 억제를 초래한다. CTLA4-Ig 분자는 따라서 조직 및/또는 고형 기관 이식 거부반응의 억제 방법, 뿐만 아니라 일반적으로 자가면역을 비롯한 이상조절된 면역 반응에 관련된 질환 또는 장애에 대한 치료 용도를 제공할 수 있다. 예를 들어, CTLA4-Ig 분자는 항-dsDNA 항체의 생성을 억제하고 루푸스 경향 마우스에서의 신장염을 감소시킬 수 있고; 단백뇨증을 감소시키고 진행된 신장염을 앓는 마우스의 생존을 연장시킬 수 있고; 건선 및 류마티스양 관절염의 임상 결과를 개선할 수 있다. CTLA4-Ig 분자의 치료 유용성을 개선시키기 위해서는, 예를 들어, B7 항원에 대한 분자의 결합활성 및 효능을 증가시킴으로써 T 세포 자극의 억제제로서의 분자의 효능을 증진시킬 수 있는 분자 변이를 측정하는 것이 중요하다. CTLA4-Ig 분자의 결합활성 및 효능에서의 증가는 감소된 양의 CTLA4-Ig 분자를 환자에게 투여하여 목적하는 치료 효과를 달성하는 것 (즉, 보다 적은 용량의 투여)을 가능하게 할 수 있다. CTLA4-Ig 분자의 결합활성 및 효능에서의 증가는 또한 목적하는 치료 효과를 달성하기 위해 환자에게 투여되는 용량의 수 또는 빈도를 감소시킬 수 있다. 발명의 요약 본 발명은 CTLA4-Ig 조성물을 제조하기 위한 개선된 조성물 및 방법에 관한 것이다. 본 발명은 CTLA4-Ig 분자, CTLA4-Ig 분자를 포함하는 개선된 조성물, 및 CTLA4-Ig 분자 및 다른 재조합 단백질을 생산 (대량 생산 포함)하기 위한 개선된 방법에 관한 것이다. 본 발명은 단독으로 기재되어 있든지 또는 특정 조합 또는 순열로 기재되어 있든지, 본원에 기재된 임의의 요소 및 특징의 임의의 순열 및/또는 조합을 포함한다. 세포: 본 발명은 CTLA4-Ig를 생산할 수 있는 클로날 차이니즈 햄스터 난소 (Chinese Hamster Ovary) 세포 집단을 제공한다. 본 발명은 CTLA4-Ig를 생산할 수 있는 클로날 차이니즈 햄스터 난소 세포 집단을 제공하며, 각 세포는 30 카피 이상의 CTLA4-Ig 발현 카셋트를 포함한다. 본 발명은 또한 CTLA4-Ig를 생산할 수 있는 클로날 차이니즈 햄스터 난소 세포 집단을 제공하며, 각 세포는 30 카피 이상의 CTLA4-Ig 발현 카셋트를 포함하고, 여기서 30 카피 이상은 각 세포의 게놈 내 단일 부위에서 통합된다. 본 발명은 CTLA4-Ig를 생산할 수 있는 클로날 차이니즈 햄스터 난소 세포 집단을 제공하며, 여기서 CTLA4-Ig 발현 카셋트는 약 105회 계대배양에 걸쳐 안정하다. 한 실시양태에서, CTLA4-Ig는 전체 내용이 본원에 참고로 포함된 문헌 [Koduri R., et al. (Gene, 2001, 280:87-95)] 및 미국 특허 제6,800,457호 및 동 제6,521,419호에 기재된 핵산 서열을 포함하는 발현 카셋트에 의해 코딩된다. 또 다른 실시양태에서, CTLA4-Ig는 전체 내용이 본원에 참고로 포함된 문헌 [Koduri R., et al. (Gene, 2001, 280:87-95)] 및 미국 특허 제6,800,457호 및 동 제6,521,419호에 기재된 특정 유전자좌에서 세포 집단으로부터 세포 게놈에 통합된 발현 카셋트에 의해 코딩된다. 한 실시양태에서, 집단은 33 카피 이상의 CTLA4-Ig 발현 카셋트를 포함하는 세포의 아집단을 포함하며, 여기서 33 카피 이상은 아집단의 각 세포의 게놈 내 단일 부위에서 통합된다. 본 발명은 CTLA4-Ig를 생산할 수 있는 클로날 차이니즈 햄스터 난소 세포 집단을 제공하며, 여기서 세포 집단의 75％ 이상은 30 카피 이상의 CTLA4-Ig 발현 카셋트를 가지며, 여기서 30 카피 이상은 집단의 75％의 각 세포의 게놈 내 단일 부위에서 통합된다. 본 발명은 CTLA4-Ig를 생산할 수 있는 클로날 차이니즈 햄스터 난소 세포 집단을 제공하며, 여기서 세포 집단의 85％ 이상은 30 카피 이상의 CTLA4-Ig 발현 카셋트를 가지며, 여기서 30 카피 이상은 집단의 85％의 각 세포의 게놈 내 단일 부위에서 통합된다. 본 발명은 CTLA4-Ig를 생산할 수 있는 클로날 차이니즈 햄스터 난소 세포 집단을 제공하며, 여기서 세포 집단의 95％ 이상은 30 카피 이상의 CTLA4-Ig 발현 카셋트를 가지며, 여기서 30 카피 이상은 집단의 95％의 각 세포의 게놈 내 단일 부위에서 통합된다. 한 실시양태에서, 세포 집단은 액체 배양물 1 리터 당 0.5 그램 이상의 CTLA4-Ig 단백질보다 많이 생산할 수 있으며, 여기서 CTLA4-Ig는 적합한 탄수화물 특징을 나타내고, 여기서 시알산 대 CTLA4-Ig의 몰비는 1,000 L 이상의 배양 규모에서 약 6 내지 약 14이다. 또 다른 실시양태에서, 세포 집단은 무혈청의 화학적으로 규정된 배지에 적응되어 있다. 또 다른 실시양태에서, 세포 집단의 배양물로부터 생산된 CTLA4-Ig는 1.00 ± 0.05 AU mL cm-1 mg-1의 흡광 계수를 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 세포 집단은, 배양물에서 성장할 때 CTLA4-Ig 폴리펩티드를 생산할 수 있으며, 여기서: (a) 약 90％의 CTLA4-Ig 폴리펩티드는 잔기 27에서 메티오닌으로 개시되는 서열 2의 아미노산 서열을 포함하고; (b) 약 10％의 CTLA4-Ig 폴리펩티드는 잔기 26에서 알라닌으로 개시되는 서열 2의 아미노산 서열을 포함하고; (c) 약 4％의 CTLA4-Ig 폴리펩티드는 잔기 383에서 리신으로 종결되는 서열 2의 아미노산 서열을 포함하고; (d) 약 96％의 CTLA4-Ig 폴리펩티드는 잔기 382에서 글리신으로 종결되는 서열 2의 아미노산 서열을 포함하고; 임의로, (e) 약 1％ 미만의 CTLA4-Ig 폴리펩티드는 잔기 25에서 메티오닌으로 개시되는 서열 2의 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명은 클로날 세포의 자손 세포를 제공하며, 여기서 자손 세포는 CTLA4-Ig를 생산한다. 한 실시양태에서, 자손 세포는 5 세대 이상에 걸쳐 클로날 부모 세포를 배양하여 수득된다. 또 다른 실시양태에서, 자손 세포는 10 세대 이상에 걸쳐, 20 세대 이상에 걸쳐, 40 세대 이상에 걸쳐, 50 세대 이상에 걸쳐, 75 세대 이상에 걸쳐, 또는 100 세대 이상에 걸쳐 세포를 배양하여 수득된다. 본 발명은 클로날 세포로부터 생산된 세포주를 제공한다. 한 실시양태에서, 세포주는 클론성이다. 본 발명은 하기를 생산할 수 있는 세포주를 제공한다: (a) 서열 10 (아미노산 위치 27에 메티오닌 및 아미노산 위치 382에 글리신; 도 1A 및 1B)의 아미노산 서열을 갖는 CTLA4-Ig 융합 단백질; (b) 서열 7 (아미노산 위치 27에 메티오닌 및 아미노산 위치 383에 리신; 도 1A 및 1B)의 아미노산 서열을 갖는 CTLA4-Ig 융합 단백질; (c) 서열 9 (아미노산 위치 26에 알라닌 및 아미노산 위치 382에 글리신; 도 1A 및 1B)의 아미노산 서열을 갖는 CTLA4-Ig 융합 단백질; (d) 서열 6 (아미노산 위치 26에 알라닌 및 아미노산 위치 383에 리신; 도 1A 및 1B)의 아미노산 서열을 갖는 CTLA4-Ig 융합 단백질; (e) 서열 8 (아미노산 위치 25에 메티오닌 및 아미노산 위치 382에 글리신; 도 1A 및 1B)의 아미노산 서열을 갖는 CTLA4-Ig 융합 단백질; 또는 (f) 서열 5 (아미노산 위치 25에 메티오닌 및 아미노산 위치 383에 리신; 도 1A 및 1B)의 아미노산 서열을 갖는 CTLA4-Ig 융합 단백질. 또 다른 실시양태에서, 세포주는 CTLA4-Ig 융합 단백질을 생산할 수 있으며, 여기서: (a) 약 90％의 CTLA4-Ig 폴리펩티드는 잔기 27에서 메티오닌으로 개시되는 서열 2의 아미노산 서열을 포함하고; (b) 약 10％의 CTLA4-Ig 폴리펩티드는 잔기 26에서 알라닌으로 개시되는 서열 2의 아미노산 서열을 포함하고; (c) 약 4％의 CTLA4-Ig 폴리펩티드는 잔기 383에서 리신으로 종결되는 서열 2의 아미노산 서열을 포함하고; (d) 약 96％의 CTLA4-Ig 폴리펩티드는 잔기 382에서 글리신으로 종결되는 서열 2의 아미노산 서열을 포함하고; 임의로, (e) 약 1％ 미만의 CTLA4-Ig 폴리펩티드는 잔기 25에서 메티오닌으로 개시되는 서열 2의 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 세포주를 배양하여 생산된 CTLA4-Ig 융합 단백질은 1.00 ± 0.05 AU mL cm-1 mg-1의 흡광 계수를 갖는다. 본 발명은 클로날 세포주로부터 유래된 세포 집단을 제공한다. 한 실시양태에서, 세포 집단은 기원 클로날 세포주와 비교하여 하나 이상의 추가의 유전자 변화를 포함하며, 여기서 유래된 세포 집단은 CTLA4-Ig를 생산할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 세포 집단은 부모 세포와 비교하여 2 이상, 3 이상, 4 이상, 5 이상, 6 이상, 7 이상, 8 이상, 10 이상, 15 이상, 또는 20 이상의 추가의 유전자 변화를 포함하며, 여기서 유래된 세포 집단은 CTLA4-Ig를 생산할 수 있다. 한 실시양태에서, 유전자 변화는 세포 게놈 내 또는 CTLA4-Ig를 코딩하는 재조합 발현 카셋트 내의 하나 이상의 비-보존성 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 유전자 변화는 세포 내에 하나 이상의 추가의 재조합 핵산을 포함한다. 추가의 실시양태에서, 변화는 세포 게놈의 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 변화는 핵산의 세포 게놈에의 또는 항-아폽토시스성 폴리펩티드를 코딩하는 트랜스 핵산으로서의 부가를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항-아폽토시스성 폴리펩티드는 글리코실화에 관련된다. 또 다른 실시양태에서, 유전자 변화는 세포 게놈의 또는 CTLA4-Ig를 코딩하는 재조합 발현 카셋트의 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 조성물: 본 발명은 약 6 내지 약 18의 시알산 기 대 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 평균 몰비를 갖는 CTLA4-Ig 분자의 집단을 제공한다. 본 발명은 약 8 내지 약 18의 시알산 기 대 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 평균 몰비를 갖는 CTLA4-Ig 분자의 집단을 제공한다. 본 발명은 약 11 내지 약 18의 시알산 기 대 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 평균 몰비를 갖는 CTLA4-Ig 분자의 집단을 제공한다. 본 발명은 약 12 내지 약 18의 시알산 기 대 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 평균 몰비를 갖는 CTLA4-Ig 분자의 집단을 제공한다. 본 발명은 약 13 내지 약 18의 시알산 기 대 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 평균 몰비를 갖는 CTLA4-Ig 분자의 집단을 제공한다. 본 발명은 약 14 내지 약 18의 시알산 기 대 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 평균 몰비를 갖는 CTLA4-Ig 분자의 집단을 제공한다. 본 발명은 약 15 내지 약 17의 시알산 기 대 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 평균 몰비를 갖는 CTLA4-Ig 분자의 집단을 제공한다. 본 발명은 약 16의 시알산 기 대 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 평균 몰비를 갖는 CTLA4-Ig 분자의 집단을 제공한다. 본 발명은 95％ 초과의 분자가 CTLA4-Ig 이량체인 CTLA4-Ig 분자의 집단을 제공한다. 한 실시양태에서, 98％ 초과의 분자가 CTLA4-Ig 이량체이다. 또 다른 실시양태에서, 99％ 초과의 분자가 CTLA4-Ig 이량체이다. 또 다른 실시양태에서, 99.5％ 초과의 분자가 CTLA4-Ig 이량체이다. 또 다른 실시양태에서, 약 95％ 내지 약 99.5％의 분자가 CTLA4-Ig 이량체이고 약 0.5％ 내지 약 5％의 분자가 CTLA4-Ig 사량체 또는 고분자량 종이다. 또 다른 실시양태에서, 약 98.6％의 분자가 CTLA4-Ig 이량체이고 약 1.2％의 분자가 CTLA4-Ig 사량체 또는 고분자량이고, 약 0.7％ 미만의 분자가 CTLA4-Ig 단량체이다. 본 발명은 CTLA4-Ig 이량체로 구성된 집단을 제공한다. 본 발명은 CTLA4-Ig 단량체를 실질적으로 함유하지 않는 CTLA4-Ig 분자의 집단을 제공한다. 본 발명은 CTLA4-Ig 사량체를 실질적으로 함유하지 않는 CTLA4-Ig 분자의 집단을 제공한다. 본 발명은 CTLA4-Ig 이량체 및 사량체를 실질적으로 함유하지 않는 CTLA4-Ig 단량체 분자의 집단을 제공한다. 한 실시양태에서, 각 CTLA4-Ig 이량체의 각 단량체는 3개 이상의 시알산 기를 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 각 CTLA4-Ig 이량체의 각 단량체는 3개 이상 내지 8개 이상의 시알산 기를 갖는다. 본 발명은 CTLA4-Ig 이량체를 실질적으로 함유하지 않고, 임의로 약 100 그램 초과의 양을 포함하는 CTLA4-Ig 사량체 분자의 정제된 집단을 제공한다. 본 발명은 CTLA4-Ig 단량체를 실질적으로 함유하지 않고, 임의로 약 100 그램 초과의 양을 포함하는 CTLA4-Ig 사량체 분자의 정제된 집단을 제공한다. 한 실시양태에서, 각 사량체 분자는 2쌍의 CTLA4-Ig 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 5-10으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지고, 폴리펩티드의 쌍의 각 일원은 다른 일원에 공유적으로 연결되어 있고, 2쌍의 폴리펩티드는 서로 비공유적으로 결합되어 있다. 또 다른 실시양태에서, 각 사량체 분자는 CD80 또는 CD86에 결합될 수 있다. 추가의 실시양태에서, 각 사량체 분자는 CTLA4-Ig 이량체 분자와 비교하여 2배 이상 더 높은 CD80 또는 CD86에 대한 결합활성을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 각 사량체 분자는 CTLA4-Ig 이량체 분자와 비교하여 2배 이상 더 높은 T 세포 증식 또는 활성화의 억제율을 갖는다. 본 발명은 등전 집중법에 의해 측정된 5.1 이하의 등전점 (pI)을 갖는 CTLA4-Ig의 등전 집중 겔 상에서 시각화가능한 우세한 이소형을 포함하는, CTLA4-Ig 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 등전 집중법에 의해 측정된 5.8 이하의 등전점 (pI)을 갖는 CTLA4-Ig의 등전 집중 겔 상에서 시각화가능한 우세한 이소형을 포함하는, CTLA4-Ig 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 한 실시양태에서, pI는 뉴라미니다제 처리 후에 증가한다. 한 실시양태에서, 조성물은 등전 집중법에 의해 측정된 5.7, 5.6, 5.5, 5.4, 5.3, 5.2, 5.1, 5.0, 4.9, 4.8, 4.7, 4.6, 또는 4.5 이하의 등전점 (pI)을 갖는 CTLA4-Ig의 등전 집중 겔 상에서 시각화가능한 우세한 이소형을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 40％ 이상의 CTLA4-Ig 분자는 등전 집중법에 의해 측정된 약 5.1 이하의 등전점을 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 70％ 이상의 CTLA4-Ig 분자는 등전 집중법에 의해 측정된 약 5.1 이하의 등전점을 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 90％ 이상의 CTLA4-Ig 분자는 등전 집중법에 의해 측정된 약 2.5 이하의 등전점을 나타낸다. 본 발명은 약 2.0 ± 0.2 내지 약 5.0 ± 0.2의 pI를 갖는 CTLA4-Ig 분자의 집단을 제공한다. 본 발명은 약 4.0 ± 0.2 내지 약 5.0 ± 0.2의 pI를 갖는 CTLA4-Ig 분자의 집단을 제공한다. 본 발명은 약 4.3 ± 0.2 내지 약 5.0 ± 0.2의 pI를 갖는 CTLA4-Ig 분자의 집단을 제공한다. 본 발명은 약 3.3 ± 0.2 내지 약 4.7 ± 0.2의 pI를 갖는 CTLA4-Ig 분자의 집단을 제공한다. 본 발명은 (a) CTLA4-Ig 분자의 혼합물을 등전 집중 겔 전기영동시키며, 여기서 겔 상의 단일 밴드는 특정 pI를 갖는 CTLA4-Ig 분자의 집단을 나타내는 것인 단계, 및 (b) 약 2.0 ± 0.2 내지 약 5.0 ± 0.2의 pI를 갖는 CTLA4-Ig 분자의 집단을 단리하여 조성물을 제조하는 단계를 포함하는, 약 2.0 ± 0.2 내지 약 5.0 ± 0.2의 pI를 갖는 CTLA4-Ig 분자를 포함하는 조성물의 제조 방법을 제공한다. 본 발명은 약 15 내지 약 35의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 GlcNAc의 평균 몰비를 특징으로 하는 CTLA4-Ig 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 약 1.7 내지 약 3.6의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 GalNAc의 평균 몰비를 특징으로 하는 CTLA4-Ig 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 약 8 내지 약 17의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 갈락토스의 평균 몰비를 특징으로 하는 CTLA4-Ig 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 약 3.5 내지 약 8.3의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 푸코스의 평균 몰비를 특징으로 하는 CTLA4-Ig 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 약 7.2 내지 약 22의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 만노스의 평균 몰비를 특징으로 하는 CTLA4-Ig 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 약 6 내지 약 12의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비를 특징으로 하는 CTLA4-Ig 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 (a) 약 15 내지 약 35의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 GlcNAc의 평균 몰비; 및 (b) 약 6 내지 약 12의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비를 특징으로 하는 CTLA4-Ig 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 (a) 약 15 내지 약 35의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 GlcNAc의 평균 몰비; (b) 약 1.7 내지 약 3.6의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 GalNAc의 평균 몰비; 및 (c) 약 6 내지 약 12의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비를 특징으로 하는 CTLA4-Ig 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 (a) 약 15 내지 약 35의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 GlcNAc의 평균 몰비; (b) 약 1.7 내지 약 3.6의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 GalNAc의 평균 몰비; (c) 약 8 내지 약 17의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 갈락토스의 평균 몰비; 및 (d) 약 6 내지 약 12의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비를 특징으로 하는 CTLA4-Ig 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 (a) 약 15 내지 약 35의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 GlcNAc의 평균 몰비; (b) 약 1.7 내지 약 3.6의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 GalNAc의 평균 몰비; (c) 약 8 내지 약 17의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 갈락토스의 평균 몰비; (d) 약 3.5 내지 약 8.3의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 푸코스의 평균 몰비; 및 (e) 약 6 내지 약 12의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비를 특징으로 하는 CTLA4-Ig 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 (a) 약 15 내지 약 35의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 GlcNAc의 평균 몰비; (b) 약 1.7 내지 약 3.6의 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 몰 당 GalNAc의 평균 몰비; (c) 약 8 내지 약 17의 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 몰 당 갈락토스의 평균 몰비; (d) 약 3.5 내지 약 8.3의 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 몰 당 푸코스의 평균 몰비; (e) 약 7.2 내지 약 22의 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 몰 당 만노스의 평균 몰비; 및 (f) 약 6 내지 약 12의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비를 특징으로 하는 CTLA4-Ig 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 약 9.589+/-0.3의 NGNA 크로마토그램 피크 및 약 10.543+/-0.3의 NANA 크로마토그램 피크를 나타내는, CTLA4-Ig 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 도 68에 도시된 바와 같은 탄수화물 프로파일을 나타내는 CTLA4-Ig 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 도메인 (Domain) I-V (예컨대, I-IV)의 탄수화물 프로파일를 나타내는 CTLA4-Ig 분자를 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서 도메인 I은 아시알릴화 올리고사카라이드를 나타내는 피크를 포함하고, 도메인 II는 모노-시알릴화 올리고사카라이드를 나타내는 피크를 포함하고, 도메인 III은 디-시알릴화 올리고사카라이드를 나타내는 피크를 포함하고, 도메인 IV는 트리-시알릴화 올리고사카라이드를 나타내는 피크를 포함한다. 도메인 V는 테트라-시알릴화 올리고사카라이드를 나타내는 피크를 포함한다. 한 실시양태에서, 도메인 I에서의 제1 피크 및 도메인 II에서의 주 피크 간의 N-연결된 올리고사카라이드의 체류 시간에서의 차이는 약 22 내지 약 28분이다. 본 발명은 0.5％ 이상의 CTLA4-Ig 이량체 분자가 시스테이닐화되어 있는 CTLA4-Ig 이량체 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 한 실시양태에서, 1.0％ 이상의 CTLA4-Ig 이량체 분자가 시스테이닐화되어 있다. 본 발명은 도 8 및 10에 도시된 바와 같은 질량 분광 프로파일을 나타내는, CTLA4-Ig 분자의 집단을 제공한다. 본 발명은 도 20 및 21에 도시된 바와 같은 모세관 전기영동 프로파일을 나타내는, CTLA4-Ig 분자의 집단을 제공한다. 본 발명은 약 6 내지 약 18의 시알산 기 대 CTLA4-Ig 이량체의 평균 몰비를 갖는 CTLA4-Ig 분자의 조성물을 제공한다. 본 발명은 본원에 기재된 어느 방법에 의해 수득된 CTLA4-Ig 조성물을 제공한다. 본 발명은 서열 2의 위치 102에서의 아스파라긴 아미노산 잔기, 서열 2의 위치 134에서의 아스파라긴 아미노산 잔기, 서열 2의 위치 233에서의 아스파라긴 아미노산 잔기, 서열 2의 위치 155에서의 세린 아미노산 잔기, 또는 서열 2의 위치 165에서의 세린 아미노산 잔기에서 글리코실화되어 있는 CTLA4-Ig 분자의 집단을 제공한다. 본 발명은 (a) 약 15 내지 약 35의 CTLA4-Ig 이량체 또는 CTLA4-Ig 분자의 몰 당 GlcNAc의 평균 몰비; (b) 약 1.7 내지 약 3.6의 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 몰 당 GalNAc의 평균 몰비; (c) 약 8 내지 약 17의 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 몰 당 갈락토스의 평균 몰비; (d) 약 3.5 내지 약 8.3의 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 몰 당 푸코스의 평균 몰비; (e) 약 7.2 내지 약 22의 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 몰 당 만노스의 평균 몰비; (f) 약 6 내지 약 12의 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비; (g) 약 2.4 ± 0.2 내지 약 5.0 ± 0.2 범위의 등전 집중 겔 상에서의 시각화로부터 측정된 pI; (h) 5 ppm 이하의 MCP-1; (i) 3.0％ 미만의 사량체 (예컨대, 2.5％ 고분자량 종 또는 사량체, 2.0％ 고분자량 종 또는 사량체); (j) 0.5％ 미만의 단량체; (k) 서열 2-8 중 어느 것과 95％ 이상 동일한 아미노산을 갖는 집단의 CTLA4-Ig 폴리펩티드; (l) 집단 내 CTLA4-Ig 분자는 CD80 및 CD86에 결합할 수 있음를 특징으로 하는 CTLA4-Ig 분자의 집단을 제공한다. 조성물: 본 발명은 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 분자 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 2005년 12월 20일에 출원된 미국 특허 출원 제60/752,150호에 기재된 바와 같은 부형제를 포함하는 조성물을 제공한다. 한 실시양태에서, 조성물은 CTLA4-Ig를 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 제약상 허용되는 희석제, 보조제 또는 담체를 더 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 말토스, 제일인산나트륨 일수화물, 염화나트륨, 수산화나트륨, 및 멸균수를 더 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 수크로스, 폴록사머, 제일인산나트륨 일수화물, 무수 제이인산나트륨, 염화나트륨, 수산화나트륨, 및 멸균수를 포함한다. 제제 및 키트: 본 발명은 95％ 이상의 CTLA4-Ig 이량체 및 5％ 이하의 CTLA4-Ig 사량체를 포함하는 동결건조된 CTLA4-Ig 혼합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 혼합물은 98％ 이상의 CTLA4-Ig 이량체 및 2％ 이하의 CTLA4-Ig 고분자량 종 또는 사량체를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 혼합물은 99％ 이상의 CTLA4-Ig 이량체 및 1％ 이하의 CTLA4-Ig 고분자량 종 또는 사량체를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 혼합물은 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 몰 당 8.0 몰 이상의 시알산을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 혼합물은 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 몰 당 약 15.7 내지 약 31 몰의 GlcNAc를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 혼합물은 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 몰 당 약 1.6 내지 약 3.2 몰의 GalNAc를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 혼합물은 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 몰 당 약 9.3 내지 약 15.5 몰의 갈락토스를 포함한다. 한 실시양태에서, 혼합물은 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 몰 당 약 3.6 내지 약 7.9 몰의 푸코스를 포함한다. 한 실시양태에서, 혼합물은 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 몰 당 약 9.7 몰의 만노스를 포함한다. 본 발명은 또한 (a) 본 발명의 동결건조된 CTLA4-Ig 혼합물을 함유하는 용기; 및 (b) 동결건조된 CTLA4-Ig 혼합물의 주사용액으로의 재구성에 관한 지침서를 포함하는 제약 키트를 제공한다. 예시적 치료 방법: 본 발명은 T 세포를 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, T 세포 증식 (또는 활성화)의 억제 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 조성물을 면역 반응의 억제가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 면역 반응의 억제 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 조성물을 항원에 대한 면역 관용의 유도가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 항원에 대한 면역 관용의 유도 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 조성물을 염증의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 염증의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 조성물을 류마티스양 관절염의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 류마티스양 관절염의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 조성물을 건선의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 건선의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 조성물을 루푸스의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 루푸스의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 조성물을 알레르기의 치료 또는 예방이 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 알레르기의 치료 또는 예방 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 조성물을 이식편 대 숙주 질환의 치료 또는 예방이 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 이식편 대 숙주 질환의 치료 또는 예방 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 조성물을 이식된 기관의 거부반응의 치료 또는 예방이 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 이식된 기관의 거부반응의 치료 또는 예방 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 조성물을 다발성 경화증의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 다발성 경화증의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 조성물을 크론병의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 크론병의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 조성물을 제I형 당뇨병의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 제I형 당뇨병의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 조성물을 염증성 장 질환의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 염증성 장 질환의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 조성물을 난소염의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 난소염의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 조성물을 사구체신염의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 사구체신염의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 조성물을 알레르기성 뇌척수염의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 알레르기성 뇌척수염의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 조성물을 중증 근무력증의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 중증 근무력증의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 면역 장애의 치유적 및/또는 예방적 치료를 위한 의약에 제조에 있어서 약 6 내지 약 18의 시알산 기 대 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 평균 몰비를 갖는 CTLA4-Ig 분자의 집단의 용도를 제공한다. 본 발명은 류마티스양 관절염의 치료에서의 사용에 관한 지침서를 포함한 포장물로의 항-류마티스양 관절염 약제의 제조에 있어서 약 6 내지 약 18의 시알산 기 대 CTLA4-Ig 이량체 또는 분자의 평균 몰비를 갖는 CTLA4-Ig 분자의 집단의 용도를 제공한다. 예시적 조합 요법: 본 발명은 T 세포를 메토트렉세이트와 조합한 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, T 세포 증식 (또는 활성화)의 억제 방법을 제공한다. 본 발명은 메토트렉세이트와 조합한 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 조성물을 면역 반응의 억제가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 면역 반응의 억제 방법을 제공한다. 본 발명은 메토트렉세이트와 조합한 유효량의 본 발명의 CTLA4-Ig 조성물을 항원에 대한 면역 관용의 유도가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 항원에 대한 면역 관용의 유도 방법을 제공한다. CTLA4-Ig의 생산 방법: 본 발명은 (a) 재조합 단백질을 분비하는 포유동물 세포를 확장시키며, 여기서 확장은 시드 배양물로부터 액체 배양물로의 확장이고, 재조합 단백질 농도는 액체 배양물 L 당 0.5 그램 이상인 단계; 및 (b) 재조합 단백질을 액체 배양물로부터 단리하는 단계를 포함하는 재조합 단백질의 생산 방법을 제공한다. 액체 배양물은 1,000 L 이상, 5,000 L 이상, 10,000 L 이상, 15,000 L 이상, 20,000 L 이상, 25,000 L 이상, 30,000 L 이상, 40,000 L 이상일 수 있다. 한 실시양태에서, 확장 단계 (a)는 (i) 세포를 무혈청의 화학적으로 규정된 배지 중에서 4회 이상의 계대배양으로 배양시켜 mL 당 생존가능한 세포 약 1.0 x 105개 이상의 세포 밀도를 수득하며, 여기서 각 시딩 단계는 ml 당 약 2 x 105개로 시작하여 ml 당 1백만 내지 2백만개 세포로 진행되고; (ii) 배양물로부터 약 0.5 g/L 이상을 생산하기에 충분한 시간 동안 세포를 배양물 중에서 유지시키는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 단백질은 당단백질이다. 한 실시양태에서, 단백질은 CTLA4-Ig 단백질이다. 한 실시양태에서, 포유동물 세포는 CTLA4-Ig 융합 단백질을 생산할 수 있는 CHO 클로날 세포주의 자손이며, 여기서 CHO 세포는 30 카피 이상의 CTLA4-Ig 발현 카셋트를 그들의 게놈 내에 안정하게 통합한다. 한 실시양태에서, 충분한 시간은 세포 생존도가 30％ 미만으로 감소되지 않는 시간이다. 또 다른 실시양태에서, 충분한 시간은 세포 생존도가 40％ 미만으로 감소되지 않는 시간이다. 또 다른 실시양태에서, 충분한 시간은 세포 생존도가 50％ 미만으로 감소되지 않는 시간이다. 또 다른 실시양태에서, 충분한 시간은 세포 생존도가 60％ 미만으로 감소되지 않는 시간이다. 또 다른 실시양태에서, 충분한 시간은 세포 생존도가 70％, 또는 80％ 또는 90％ 또는 95％ 미만으로 감소되지 않는 시간이다. 추가의 실시양태에서, 4회 이상의 계대배양은 (i) ml 당 약 1백만 내지 약 2.5백만개 세포의 세포 밀도에 이를 때까지 세포를 50 mL 이상의 배양 용량으로 성장시키는 단계, (ii) ml 당 약 1백만 내지 약 2.5백만개 세포의 세포 밀도에 이를 때까지 세포를 10 L 이상의 배양 용량으로 성장시키는 단계; (iii) ml 당 약 1백만 내지 약 2.5백만개 세포의 세포 밀도에 이를 때까지 세포를 100 L 이상의 배양 용량으로 성장시키는 단계; 및 (iv) ml 당 약 1백만 내지 약 2.5백만개 세포의 세포 밀도에 이를 때까지 세포를 200 L의 배양 용량으로 성장시키는 단계를 포함한다. 한 실시양태에서, 갈락토스를 무혈청의 화학적으로 규정된 배지에 첨가한다. 한 실시양태에서, 유지는 (i) 배양 온도를 37±2℃에서 34±2℃로 낮추고; (ii) 배양 온도를 34±2℃에서 32±2℃로 낮추는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 5일 이상 동안 32±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 6일 이상 동안 32±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 7일 이상 동안 32±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 8일 이상 동안 32±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 9일 이상 동안 32±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 10일 이상 동안 32±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 11일 이상 동안 32±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 12일 이상 동안 32±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 13일 이상 동안 32±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 14일 이상 동안 32±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 15일 이상 동안 32±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 16일 이상 동안 32±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 17일 이상 동안 32±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 18일 이상 동안 32±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 18일 이하 동안 32±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 배양물의 세포 밀도가 액체 배양물 mL 당 약 30 x 105 내지 약 79 x 105개의 세포일 때까지 32±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 본 발명은 (a) 재조합 단백질 농도가 액체 배양물 L 당 0.5 그램 이상이도록, 재조합 단백질을 분비하는 포유동물 세포를 시드 배양물로부터 액체 배양물로 확장시키는 단계; 및 (b) 재조합 단백질을 액체 배양물로부터 단리하며, 여기서 단리는 액체 배양물이 CTLA4-Ig 단백질 또는 이량체 몰 당 약 6.0 몰 이상의 NANA를 함유하는 경우에만 수행되는 것인 단계를 포함하는, 재조합 단백질의 생산 방법을 제공한다. 본 발명은 (a) 재조합 단백질 농도가 액체 배양물 L 당 0.5 그램 이상이도록, 재조합 단백질을 분비하는 포유동물 세포를 시드 배양물로부터 액체 배양물로 확장시키는 단계; 및 (b) 재조합 단백질을 액체 배양물로부터 단리하며, 여기서 단리는 액체 배양물이 mL 당 약 33 x 105 내지 약 79 x 105개 세포의 세포 밀도를 갖는 경우에만 수행되는 것인 단계를 포함하는, 재조합 단백질의 생산 방법을 제공한다. 본 발명은 (a) 재조합 단백질 농도가 액체 배양물 L 당 0.5 그램 이상이도록, 재조합 단백질을 분비하는 포유동물 세포를 시드 배양물로부터 액체 배양물로 확장시키는 단계; 및 (b) 재조합 단백질을 액체 배양물로부터 단리하며, 여기서 단리는 액체 배양물 중에서의 세포 생존도가 약 20％, 또는 약 30％, 또는 약 38％ 미만으로 감소되지 않는 경우에 수행되는 것인 단계를 포함하는, 재조합 단백질의 생산 방법을 제공한다. 본 발명은 (a) 재조합 단백질 농도가 액체 배양물 L 당 0.5 그램 이상이도록, 재조합 단백질을 분비하는 포유동물 세포를 시드 배양물로부터 10,000 L 이상의 액체 배양물로 확장시키는 단계; 및 (b) 재조합 단백질을 액체 배양물로부터 단리하며, 여기서 단리는 내독소가 액체 배양물 mL 당 약 76.8 EU 이하인 경우에만 수행되는 것인 단계를 포함하는, 재조합 단백질의 생산 방법을 제공한다. 본 발명은 (a) 재조합 단백질 농도가 액체 배양물 L 당 0.5 그램 이상이도록, 재조합 단백질을 분비하는 포유동물 세포를 시드 배양물로부터 10,000 L 이상의 액체 배양물로 확장시키는 단계; 및 (b) 재조합 단백질을 10,000 L 이상의 액체 배양물로부터 단리하며, 여기서 단리는 바이오버든 (bioburden)이 액체 배양물 mL 당 1 콜로니 형성 단위 미만인 경우에만 수행되는 것인 단계를 포함하는, 재조합 단백질의 생산 방법을 제공한다. 본 발명의 액체 배양물은 5,000 L 이상, 10,000 L 이상, 15,000 L 이상, 20,000 L 이상, 25,000 L 이상, 30,000 L 이상, 40,000 L 이상, 50,000 L 이상, 60,000 L 이상의 용량일 수 있다. 본 발명은 (a) 재조합 단백질 농도가 액체 배양물 L 당 0.5 그램 이상이도록, 재조합 단백질을 분비하는 포유동물 세포를 시드 배양물로부터 액체 배양물로 확장시키는 단계; 및 (b) 재조합 단백질을 액체 배양물로부터 단리하며, 여기서 단리는 하기 조건: (i) 액체 배양물이 단백질 몰 당 약 6.0 몰 이상의 NANA를 함유하는 조건, (ii) 액체 배양물이 mL 당 약 33 x 105 내지 약 79 x 105개 세포의 세포 밀도를 갖는 조건, (iii) 액체 배양물 중에서의 세포 생존도가 약 20％, 또는 약 38％ 미만으로 감소되지 않는 조건, 또는 (iv) 배양물 중의 CTLA4-Ig의 양이 0.5 g/L 초과인 조건 중 2개 이상이 부합되는 경우에만 수행되는 것인 단계를 포함하는, 재조합 단백질의 생산 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 단리는 (i) 세포 배양 상청액을 수득하는 단계; (ii) 상청액을 음이온 교환 크로마토그래피에 적용시켜 용출된 단백질 생성물을 수득하는 단계; (iii) 단계 (ii)의 용출된 단백질 생성물을 소수성 상호작용 크로마토그래피에 적용시켜 농축된 단백질 생성물을 수득하는 단계; (iv) 농축된 단백질 생성물을 친화성 크로마토그래피에 적용시켜 용출되고 농축된 단백질 생성물을 수득하는 단계; 및 (v) 단계 (iv)의 용출되고 농축된 단백질 생성물을 음이온 교환 크로마토그래피에 적용시키는 단계를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 단계 (iii)에서 수득된 농축된 단백질 생성물은 임의의 고분자량 오염물의 백분율이 25중량％ 미만임을 특징으로 한다. 또 다른 실시양태에서, 단계 (ii)의 음이온 교환 크로마토그래피는 약 75 mM HEPES 및 약 360 mM NaCl을 포함하고, 약 8.0의 pH를 갖는 세척 완충액을 사용하여 수행한다. 또 다른 실시양태에서, 단계 (ii)의 음이온 교환 크로마토그래피는 약 25 mM HEPES 및 약 325 mM NaCl을 포함하고, 약 7.0의 pH를 갖는 용출 완충액을 사용하여 수행한다. 또 다른 실시양태에서, 단계 (iii)의 소수성 상호작용 크로마토그래피는 약 25 mM HEPES 및 약 850 mM NaCl을 포함하고, 약 7.0의 pH를 갖는 단일 세척 완충액을 사용하여 수행한다. 또 다른 실시양태에서, 단계 (iv)의 친화성 크로마토그래피는 약 25 mM Tris 및 약 250 mM NaCl을 포함하고, 약 8.0의 pH를 갖는 세척 완충액을 사용하여 수행한다. 또 다른 실시양태에서, 단계 (iv)의 친화성 크로마토그래피는 약 100 mM 글리신을 포함하고 약 3.5의 pH를 갖는 용출 완충액을 사용하여 수행한다. 또 다른 실시양태에서, 단계 (v)의 음이온 교환 크로마토그래피는 약 25 mM HEPES 및 약 120 mM NaCl 내지 약 130 mM NaCl을 포함하고 약 8.0의 pH를 갖는 세척 완충액을 사용하여 수행한다. 또 다른 실시양태에서, 단계 (v)의 음이온 교환 크로마토그래피는 약 25 mM HEPES 및 약 200 mM NaCl을 포함하고 약 8.0의 pH를 갖는 용출 완충액을 사용하여 수행한다. 또 다른 실시양태에서, 단계 (ii)의 음이온 교환 크로마토그래피는 1차, 2차, 3차, 또는 4차 아민 관능기를 갖는 음이온 교환 수지를 갖는 칼럼을 사용하여 수행한다. 또 다른 실시양태에서, 수지는 4차 아민 관능기를 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 단계 (iii)의 소수성 상호작용 크로마토그래피는 페닐, 옥틸, 프로필, 알콕시, 부틸, 또는 이소아밀 관능기를 갖는 소수성 상호작용 수지를 사용하여 수행한다. 또 다른 실시양태에서, 관능기는 페닐 관능기이다. 또 다른 실시양태에서, 단계 (iv)의 친화성 크로마토그래피는 단백질 A를 함유하는 칼럼을 사용하여 수행한다. 본 발명은 정제된 CTLA4-Ig가 (a) CTLA4-Ig 이량체 mg 당 약 38 ng의 MCP-1을 갖고, (b) 2.5 중량％ 미만의 CTLA4-Ig 고분자량 종 (예컨대, 사량체)을 포함하도록 CTLA4-Ig를 액체 세포 배양물로부터 정제하는 것을 포함하는, CTLA4-Ig의 제조 방법을 제공한다. 본 발명은 (a) CTLA4-Ig를 생산할 수 있는 자손 세포 또는 CHO 세포를 확장시키며, 여기서 확장은 시드 배양물로부터 10,000 L 이상의 액체 배양물로의 확장이고, CTLA4-Ig 농도는 액체 배양물 L 당 0.5 그램 이상인 단계; 및 (b) CTLA4-Ig를 10,000 L 이상의 액체 배양물로부터 단리하며, 여기서 크로마토그래피는 적어도 페닐 관능기를 갖는 소수성 상호작용 수지를 갖는 칼럼 상에서 수행되고, 단리는 약 25 mM HEPES 및 약 850 mM NaCl을 포함하고, 약 7.0의 pH를 갖는 단일 세척 완충액을 사용하여 수행되는 소수성 상호작용 크로마토그래피의 단계를 포함하는 것인 CTLA4-Ig의 생산 방법을 제공한다. CTLA4-Ig 분자는 베타 폴리펩티드 분자를 포함한다. CTLA4A29YL104E-Ig는 베타 폴리펩티드 분자이다. 본 발명은 베타 폴리펩티드 조성물 또는 베타 폴리펩티드 분자 조성물, 및 개선된 조성물의 생산 (대량 생산 포함) 방법에 관한 것이다. 본 발명은 베타 폴리펩티드 분자, 베타 폴리펩티드 분자를 포함하는 개선된 조성물, 및 베타 폴리펩티드 분자 및 다른 재조합 당단백질의 개선된 생산 (대량 생산 포함) 방법에 관한 것이다. 베타 폴리펩티드 및 다른 당단백질의 생산 방법: 본 발명은 (a) 재조합 당단백질을 분비하는 포유동물 세포를 확장시키며, 여기서 확장은 시드 배양물로부터 약 10,000 L 이상의 액체 배양물로의 확장이고, 재조합 단백질 농도는 액체 배양물 L 당 약 0.5 그램 이상이고, 확장은 (i) 세포를 무혈청의 화학적으로 규정된 배지 중에서 4회 이상의 계대배양으로 배양시켜 mL 당 생존가능한 세포 약 1.0 x 105개 이상의 세포 밀도를 수득하며, 여기서 각 시딩 단계는 ml 당 약 2 x 105개로 시작하여 ml 당 약 1백만 내지 2백만개 세포로 진행되고, 배양은 (1) 세포를 무혈청의 화학적으로 규정된 접종 배지 중에서 약 15일 내지 약 25일 동안 배양하고; 이어서 (2) 세포를 무혈청의 화학적으로 규정된 기본 배지 중에서 mL 당 세포 약 4백만개 이상의 세포 밀도에 이를 때까지 배양하는 것을 포함하는 것인 단계; 및 (ii) 배양물로부터 재조합 단백질을 약 0.5 g/L 이상 생산하기에 충분한 시간 동안 세포를 배양물 중에서 유지시키는 단계를 포함하는 것인 단계; 및 (b) 재조합 단백질을 약 10,000 L 이상의 액체 배양물로부터 단리하는 단계를 포함하는, 재조합 당단백질의 생산 방법을 제공한다. 본 발명은 (a) 재조합 당단백질을 분비하는 포유동물 세포를 확장시키며, 여기서 확장은 시드 배양물로부터 약 10,000 L 이상의 액체 배양물로의 확장이고, 재조합 단백질 농도는 액체 배양물 L 당 약 0.5 그램 이상이고, 확장은 (i) 세포를 무혈청의 화학적으로 규정된 배지 중에서 4회 이상의 계대배양으로 배양시켜 mL 당 생존가능한 세포 약 1.0 x 105개 이상의 세포 밀도를 수득하며, 여기서 각 시딩 단계는 ml 당 약 2 x 105개로 시작하여 ml 당 약 1백만 내지 2백만개 세포로 진행되는 것인 단계; 및 (ii) 배양물로부터 재조합 단백질을 약 0.5 g/L 이상 생산하기에 충분한 시간 동안 세포를 배양물 중에서 유지시키며, 여기서 유지는 (1) 배양 온도를 37±2℃에서 34±2℃로 낮추고; (2) 다가음이온성 화합물을 배양물에 첨가하는 것을 포함하는 것인 단계; 및 (b) 재조합 단백질을 약 10,000 L 이상의 액체 배양물로부터 단리하는 단계를 포함하는, 재조합 당단백질의 생산 방법을 제공한다. 본 발명은 (a) 재조합 당단백질을 분비하는 포유동물 세포를 확장시키며, 여기서 확장은 시드 배양물로부터 약 10,000 L 이상의 액체 배양물로의 확장이고, 재조합 단백질 농도는 액체 배양물 L 당 0.5 그램 이상인 단계; 및 (b) 재조합 단백질을 약 10,000 L 이상의 액체 배양물로부터 단리하며, 여기서 단리는 (i) 단계 (a)의 배양물의 가용성 분획물을 수득하고; (ii) 가용성 분획물을 친화성 크로마토그래피에 적용시켜 용출된 단백질 생성물을 수득하고; (iii) 단계 (ii)의 용출된 단백질 생성물을 음이온 교환 크로마토그래피에 적용시켜 용출되고 농축된 단백질 생성물을 수득하고; (iv) 농축된 단백질 생성물을 소수성 상호작용 크로마토그래피에 적용시켜 농축된 단백질 생성물을 수득하는 것을 포함하는 것인 단계를 포함하는, 재조합 당단백질의 생산 방법을 제공한다. 본 발명의 한 실시양태에서, 단백질은 CTLA4-Ig를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 단백질은 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 단백질은 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16을 갖는 베타 폴리펩티드를 포함한다. 본 발명의 한 실시양태에서, 4회 이상의 계대배양은 (i) ml 당 세포 약 1백만 내지 약 2.5백만개의 세포 밀도에 이를 때까지 세포를 50 mL 이상의 배양 용량으로 성장시키는 단계, (ii) ml 당 약 1백만 내지 약 2.5백만개 세포의 세포 밀도에 이를 때까지 세포를 10 L 이상의 배양 용량으로 성장시키는 단계; (iii) ml 당 약 1백만 내지 약 2.5백만개 세포의 세포 밀도에 이를 때까지 세포를 100 L 이상의 배양 용량으로 성장시키는 단계; 및 (iv) ml 당 약 1백만 내지 약 2.5백만개 세포의 세포 밀도에 이를 때까지 세포를 200 L의 배양 용량으로 성장시키는 단계를 포함한다. 본 발명의 한 실시양태에서, 단리는 (i) 단계 (a)의 배양물의 가용성 분획물을 수득하고; (ii) 가용성 분획물을 친화성 크로마토그래피에 적용시켜 용출된 단백질 생성물을 수득하고; (iii) 단계 (ii)의 용출된 단백질 생성물을 음이온 교환 크로마토그래피에 적용시켜 용출되고 농축된 단백질 생성물을 수득하고; (iv) 농축된 단백질 생성물을 소수성 상호작용 크로마토그래피에 적용시켜 농축된 단백질 생성물을 수득하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 단계 (iv)에서 수득된 농축된 단백질 생성물은 임의의 고분자량 다량체의 백분율이 25중량％ 미만임을 특징으로 한다. 특정 실시양태에서, 단계 (iii)의 음이온 교환 크로마토그래피는 약 50 mM HEPES 및 약 135 mM NaCl을 포함하고, 약 7의 pH를 갖는 세척 완충액을 사용하여 수행한다. 또 다른 실시양태에서, 단계 (iii)의 음이온 교환 크로마토그래피는 약 50 mM HEPES 및 약 200 mM NaCl을 포함하고, 약 7의 pH를 갖는 용출 완충액을 사용하여 수행한다. 또 다른 실시양태에서, 단계 (iv)의 소수성 상호작용 크로마토그래피는 약 50 mM HEPES 및 약 1.2 M (NH4)2SO4를 포함하고, 약 7의 pH를 갖는 세척 완충액을 사용하여 수행한다. 또 다른 실시양태에서, 단계 (ii)의 친화성 크로마토그래피는 약 25 mM NaH2PO4 및 약 150 mM NaCl을 포함하고, 약 7.5의 pH를 갖는 세척 완충액을 사용하여 수행한다. 또 다른 실시양태에서, 단계 (ii)의 친화성 크로마토그래피는 약 250 mM 글리신을 포함하고 약 3의 pH를 갖는 용출 완충액을 사용하여 수행한다. 또 다른 실시양태에서, 단계 (iii)의 음이온 교환 크로마토그래피는 1차, 2차, 3차, 또는 4차 아민 관능기를 갖는 음이온 교환 수지를 갖는 칼럼을 사용하여 수행한다. 또 다른 실시양태에서, 수지는 4차 아민 관능기를 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 단계 (iii)의 소수성 상호작용 크로마토그래피는 페닐, 옥틸, 프로필, 알콕시, 부틸, 또는 이소아밀 관능기를 갖는 소수성 상호작용 수지를 사용하여 수행한다. 또 다른 실시양태에서, 관능기는 페닐 관능기이다. 또 다른 실시양태에서, 단계 (ii)의 친화성 크로마토그래피는 단백질 A를 함유하는 칼럼을 사용하여 수행한다. 또 다른 실시양태에서, 확장은 (i) 세포를 무혈청의 화학적으로 규정된 배지 중에서 4회 이상의 계대배양으로 배양시켜 mL 당 생존가능한 세포 약 1.0 x 105개 이상의 세포 밀도를 수득하며, 여기서 각 시딩 단계는 ml 당 약 2 x 105개로 시작하여 ml 당 약 1백만 내지 2백만개 세포로 진행되고, (ii) 배양물로부터 재조합 단백질을 약 0.5 g/L 이상 생산하기에 충분한 시간 동안 세포를 배양물 중에서 유지시키는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 배양은 (i) 세포를 무혈청의 화학적으로 규정된 접종 배지 중에서 약 15일 내지 약 25일 동안 배양하고; 이어서 (ii) 세포를 무혈청의 화학적으로 규정된 기본 배지 중에서 mL 당 약 4백만개 이상의 세포의 세포 밀도에 이를 때까지 배양하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 유지는 (i) 배양 온도를 37±2℃에서 34±2℃로 낮추고; (ii) 다가음이온성 화합물을 배양물에 첨가하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 다가음이온성 화합물은 덱스트란 술페이트이고 덱스트란 술페이트는 약 50 mg/ml의 최종 농도로 배양물에 첨가된다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 5일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 6일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 7일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 8일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 9일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 10일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 11일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 12일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 13일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 14일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 15일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 16일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 17일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 18일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 19일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 20일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 21일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 22일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 23일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 24일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 25일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 26일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 27일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 28일 이상 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 28일 이하 동안 34±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 또 다른 실시양태에서, 온도는 배양물의 세포 밀도가 액체 배양물 mL 당 세포 약 30 x 105 내지 약 79 x 105개일 때까지 32±2℃의 범위 내에서 유지시킨다. 한 실시양태에서, 충분한 시간은 세포 생존도가 30％ 미만으로 감소되지 않는 시간이다. 또 다른 실시양태에서, 충분한 시간은 세포 생존도가 40％ 미만으로 감소되지 않는 시간이다. 또 다른 실시양태에서, 충분한 시간은 세포 생존도가 50％ 미만으로 감소되지 않는 시간이다. 또 다른 실시양태에서, 충분한 시간은 세포 생존도가 60％ 미만으로 감소되지 않는 시간이다. 또 다른 실시양태에서, 충분한 시간은 세포 생존도가 70％, 또는 80％ 또는 90％ 또는 95％ 미만으로 감소되지 않는 시간이다. 한 실시양태에서, 갈락토스를 무혈청의 화학적으로 규정된 배지에 첨가한다. 또 다른 실시양태에서, 단리는 액체 배양물이 단백질의 몰 당 약 6 몰 이상의 시알산을 함유하는 경우에 수행된다. 또 다른 실시양태에서, 단리는 액체 배양물이 단백질의 몰 당 약 5.2 내지 약 7.6 몰의 시알산을 함유하는 경우에 수행된다. 또 다른 실시양태에서, 단리는 액체 배양물이 mL 당 약 33 x 105 내지 약 79 x 105개 세포의 세포 밀도를 갖는 경우에 수행된다. 또 다른 실시양태에서, 단리는 액체 배양물 중에서의 세포 생존도가 약 37％ 미만으로 감소되지 않는 경우에 수행된다. 또 다른 실시양태에서, 단리는 내독소가 액체 배양물 mL 당 약 4.8 EU 이하인 경우에 수행된다. 또 다른 실시양태에서, 단리는 바이오버든이 액체 배양물 mL 당 약 1 콜로니 형성 단위 (cfu/ml) 미만인 경우에 수행된다. 또 다른 실시양태에서, 단리는 하기 조건: (i) 액체 배양물이 단백질 몰 당 약 6 몰 이상의 시알산을 함유하는 조건, (ii) 액체 배양물이 mL 당 약 33 x 105 내지 약 79 x 105개 세포의 세포 밀도를 갖는 조건, (iii) 액체 배양물 중에서의 세포 생존도가 약 37％ 미만으로 감소되지 않는 조건, 또는 (iv) 배양물 중의 당단백질의 양이 약 0.46 g/L 내지 약 0.71 g/L인 조건 중 2개 이상이 부합되는 경우에 수행된다. 한 실시양태에서, 포유동물 세포는 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자의 임의 조합물을 생산하는 차이니즈 햄스터 난소 클로날 세포주의 자손이며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16을 포함하고, 차이니즈 햄스터 난소 세포는 각각 서열 3을 포함하는 30 카피 이상의 발현 카셋트를 그들의 게놈 내에 안정하게 통합한다. 한 실시양태에서, 액체 배양물은 본 발명의 생산 세포주의 세포 또는 세포의 자손 세포를 포함한다. 본 발명은 본 발명에 의해 제공된 방법에 의해 수득된 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16을 포함하는 베타 폴리펩티드를 제공한다. 본 발명은 본 발명에 의해 제공된 방법에 의해 수득된 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16을 포함하는 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 본 발명에 의해 제공된 방법에 의해 수득된 베타 폴리펩티드를 제공한다. 세포: 본 발명은 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자를 코딩하는 핵산을 포함하는 클로날 차이니즈 햄스터 난소 세포를 제공한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자를 생산하는 클로날 차이니즈 햄스터 난소 세포 집단을 제공한다. 한 실시양태에서, 베타 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16을 포함한다. 본 발명은 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 아미노산 서열을 코딩하는 발현 카셋트를 포함하는 핵산을 포함하는 클로날 차이니즈 햄스터 난소 세포를 제공한다. 한 실시양태에서, 발현 카셋트는 서열 3을 포함한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자를 생산하는 클로날 차이니즈 햄스터 난소 세포 집단을 제공하며, 여기서 베타 폴리펩티드는 부다페스트 조약의 규정 하에 2000년 6월 19일자로 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (American Type Culture Collection: ATCC, 10801 University Blvd., Manassas, VA, 20110)에 기탁된 ATCC 수탁 번호 PTA-2104를 갖는 플라스미드로부터 유래된 뉴클레오티드 서열로부터 발현된다. 본 발명은 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자를 생산하는 클로날 차이니즈 햄스터 난소 세포 집단을 제공하며, 각 세포는 30 카피 이상의 베타 폴리펩티드 발현 카셋트를 포함한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자를 생산하는 클로날 차이니즈 햄스터 난소 세포 집단을 제공하며, 각 세포는 30 카피 이상의 베타 폴리펩티드 발현 카셋트를 포함하고, 여기서 30 카피 이상은 각 세포의 게놈 내 단일 부위에서 통합된다. 본 발명은 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자를 생산하는 클로날 차이니즈 햄스터 난소 세포 집단을 제공하며, 여기서 베타 폴리펩티드 발현 카셋트는 약 105회 계대배양에 걸쳐 안정하다. 한 실시양태에서, 베타 폴리펩티드는 세포 게놈 내로 통합된 발현 카셋트에 의해 코딩된다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 생산하는 클로날 차이니즈 햄스터 난소 세포 집단을 제공하며, 여기서 세포 집단의 75％ 이상은 세포 당 30 카피 이상의 베타 폴리펩티드 발현 카셋트를 가지며, 여기서 30 카피 이상은 집단의 75％의 각 세포의 게놈 내 단일 부위에서 통합된다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 생산하는 클로날 차이니즈 햄스터 난소 세포 집단을 제공하며, 여기서 세포 집단의 85％ 이상은 세포 당 30 카피 이상의 베타 폴리펩티드 발현 카셋트를 가지며, 여기서 30 카피 이상은 집단의 85％의 각 세포의 게놈 내 단일 부위에서 통합된다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 생산하는 클로날 차이니즈 햄스터 난소 세포 집단을 제공하며, 여기서 세포 집단의 95％ 이상은 세포 당 30 카피 이상의 베타 폴리펩티드 발현 카셋트를 가지며, 여기서 30 카피 이상은 집단의 95％의 각 세포의 게놈 내 단일 부위에서 통합된다. 한 실시양태에서, 발현 카셋트는 ATCC 수탁 번호 PTA-2104로서 기탁된 플라스미드로부터 유래된다. 또 다른 실시양태에서, 발현 카셋트는 서열 3의 서열을 갖는 핵산을 포함한다. 한 실시양태에서, 세포 집단은 액체 배양물 1 리터 당 약 0.5 그램 이상의 베타 폴리펩티드를 생산하며, 여기서 베타 폴리펩티드는 1,000 L 이상의 배양 규모에서 약 5.5 내지 약 8.5의 시알산 대 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰비를 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 세포 집단은 액체 배양물 1 리터 당 5 그램 이상, 10 그램 이상 또는 20 그램 이상의 베타 폴리펩티드를 생산한다. 또 다른 실시양태에서, 베타 폴리펩티드는 1,000 L 이상의 배양 규모에서 약 5 내지 약 10의 시알산 대 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰비를 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 세포 집단은 무혈청의 화학적으로 규정된 배지에 적응되어 있다. 또 다른 실시양태에서, 세포 집단의 배양물로부터 생산된 베타 폴리펩티드는 1.0 ± 0.05 AU mL cm-1 mg-1의 흡광 계수를 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 세포 집단은, 배양물에서 성장할 때 베타 폴리펩티드를 생산하며, 여기서: (a) 약 90％의 또는 약 80％의 베타 폴리펩티드는 잔기 27에서 메티오닌으로 개시되는 서열 4의 아미노산 서열을 포함하고; (b) 약 10％ 또는 약 20％의 베타 폴리펩티드는 잔기 26에서 알라닌으로 개시되는 서열 4의 아미노산 서열을 포함하고; (c) 약 4％ 내지 약 8％의 베타 폴리펩티드는 잔기 383에서 리신으로 종결되는 서열 4의 아미노산 서열을 포함하고; (d) 약 92％ 내지 약 96％의 베타 폴리펩티드는 잔기 382에서 글리신으로 종결되는 서열 4의 아미노산 서열을 포함하고; 임의로, (e) 약 1％ 미만의 베타 폴리펩티드는 잔기 25에서 메티오닌으로 개시되는 서열 4의 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명은 본 발명의 세포 집단의 자손 세포를 제공하며, 여기서 자손 세포는 베타 폴리펩티드를 생산한다. 한 실시양태에서, 자손 세포는 5 세대 이상에 걸쳐, 10 세대 이상에 걸쳐, 20 세대 이상에 걸쳐, 40 세대 이상에 걸쳐, 50 세대 이상에 걸쳐, 75 세대 이상에 걸쳐 세포를 배양하여 수득된다. 또 다른 실시양태에서, 자손 세포는 27 세대 동안 세포를 배양하여 수득된다. 본 발명은 본 발명에 의해 제공된 임의의 세포로부터 생산된 세포주를 제공한다. 한 실시양태에서, 세포주는 클론성이다. 한 실시양태에서, 세포주는 하기를 생산한다: (a) 서열 16 (서열 4의 아미노산 위치 27에 메티오닌 및 아미노산 위치 382에 글리신)의 아미노산 서열을 갖는 베타 폴리펩티드; (b) 서열 13 (서열 4의 아미노산 위치 27에 메티오닌 및 아미노산 위치 383에 리신)의 아미노산 서열을 갖는 베타 폴리펩티드; (c) 서열 15 (서열 4의 아미노산 위치 26에 알라닌 및 아미노산 위치 382에 글리신)의 아미노산 서열을 갖는 베타 폴리펩티드; (d) 서열 12 (서열 4의 아미노산 위치 26에 알라닌 및 아미노산 위치 383에 리신)의 아미노산 서열을 갖는 베타 폴리펩티드; (e) 서열 11 (서열 4의 아미노산 위치 25에 메티오닌 및 아미노산 위치 383에 리신)의 아미노산 서열을 갖는 베타 폴리펩티드; (f) 서열 14 (서열 4의 아미노산 위치 25에 메티오닌 및 아미노산 위치 382에 글리신)의 아미노산 서열을 갖는 베타 폴리펩티드; 또는 (g) 이들의 임의의 조합물. 한 실시양태에서, 세포주는 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자를 생산하며, 여기서: (a) 약 90％ 또는 약 80％의 베타 폴리펩티드는 잔기 27에서 메티오닌으로 개시되는 서열 4의 아미노산 서열을 포함하고; (b) 약 10％ 또는 약 20％의 베타 폴리펩티드는 잔기 26에서 알라닌으로 개시되는 서열 4의 아미노산 서열을 포함하고; (c) 약 4％ 내지 약 8％의 베타 폴리펩티드는 잔기 383에서 리신으로 종결되는 서열 4의 아미노산 서열을 포함하고; (d) 약 92％ 내지 약 96％의 베타 폴리펩티드는 잔기 382에서 글리신으로 종결되는 서열 4의 아미노산 서열을 포함하고; 임의로, (e) 약 1％ 미만의 베타 폴리펩티드는 잔기 25에서 메티오닌으로 개시되는 서열 2의 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 세포주를 배양하여 생산된 베타 폴리펩티드는 1.0 ± 0.05 AU mL cm-1 mg-1의 흡광 계수를 갖는다. 본 발명은 본 발명의 세포로부터 유래된 세포 집단을 제공한다. 한 실시양태에서, 세포 집단은 집단이 유래된 본 발명의 세포와 비교하여 하나 이상의 추가의 유전자 변화를 포함하며, 여기서 세포는 베타 폴리펩티드를 생산한다. 또 다른 실시양태에서, 세포 집단은 집단이 유래된 본 발명의 세포와 비교하여 2 이상, 3 이상, 4 이상, 5 이상, 6 이상, 7 이상, 8 이상, 9 이상, 10 이상, 또는 20 이상의 추가의 유전자 변화를 포함하며, 여기서 세포는 베타 폴리펩티드를 생산한다. 한 실시양태에서, 유전자 변화는 세포 게놈 내 또는 베타 폴리펩티드를 코딩하는 발현 카셋트 내의 하나 이상의 비-보존성 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 유전자 변화는 세포 내에 하나 이상의 추가의 재조합 핵산을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 유전자 변화는 세포 게놈의 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 유전자 변화는 핵산의 세포 게놈에의 또는 항-아폽토시스성 폴리펩티드를 코딩하는 트랜스 핵산으로서의 부가를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항-아폽토시스성 폴리펩티드는 글리코실화에 관련된다. 또 다른 실시양태에서, 유전자 변화는 세포 게놈의 또는 베타 폴리펩티드를 코딩하는 발현 카셋트의 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 세포 집단은, 배양물에서 성장할 때 하기를 생산하다: (a) 서열 16 (서열 4의 아미노산 위치 27에 메티오닌 및 아미노산 위치 382에 글리신)의 아미노산 서열을 갖는 베타 폴리펩티드; (b) 서열 7 (서열 4의 아미노산 위치 27에 메티오닌 및 아미노산 위치 383에 리신)의 아미노산 서열을 갖는 베타 폴리펩티드; (c) 서열 15 (서열 4의 아미노산 위치 26에 알라닌 및 아미노산 위치 382에 글리신)의 아미노산 서열을 갖는 베타 폴리펩티드; (d) 서열 12 (서열 4의 아미노산 위치 26에 알라닌 및 아미노산 위치 383에 리신)의 아미노산 서열을 갖는 베타 폴리펩티드; (e) 서열 11 (서열 4의 아미노산 위치 25에 메티오닌 및 아미노산 위치 383에 리신)의 아미노산 서열을 갖는 베타 폴리펩티드; (f) 서열 14 (서열 4의 아미노산 위치 25에 메티오닌 및 아미노산 위치 382에 글리신)의 아미노산 서열을 갖는 베타 폴리펩티드; 또는 (g) 이들의 임의의 조합물. 조성물: 본 발명은 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자의 단리된 집단을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 약 5 내지 약 10의 시알산 기 대 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 평균 몰비를 갖는, 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 시알산 기 대 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 평균 몰비는 약 5.5 내지 약 8.5이다. 한 실시양태에서, 시알산 기 대 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 평균 몰비는 약 5.2 내지 약 7.6이다. 본 발명은 베타 폴리펩티드의 단리된 집단을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 약 6의 시알산 기 대 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 평균 몰비를 갖는, 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드의 단리된 집단을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 95％ 초과의 폴리펩티드는 이량체로 형성된다. 한 실시양태에서, 98％ 초과, 99％ 초과, 또는 99.5％ 초과의 폴리펩티드는 이량체로 형성된다. 또 다른 실시양태에서, 약 95％ 내지 약 99.5％의 폴리펩티드는 이량체로 형성되고 약 0.5％ 내지 약 5％의 폴리펩티드는 사량체 또는 고분자량 종으로 형성된다. 또 다른 실시양태에서, 약 98.6％의 폴리펩티드는 이량체로 형성되고 약 1.2％의 폴리펩티드는 사량체 또는 고분자량 종으로 형성되고 약 0.7％ 미만의 폴리펩티드는 단량체이다. 또 다른 실시양태에서, 약 95％의 폴리펩티드는 이량체로 형성되고 약 4％의 폴리펩티드는 사량체 또는 고분자량 종으로 형성되고 약 1％의 폴리펩티드는 베타 폴리펩티드 이량체의 단리된 집단이고, 여기서 각 폴리펩티드 단량체는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 집단은 베타 폴리펩티드 단량체를 실질적으로 함유하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 집단은 베타 폴리펩티드 사량체를 실질적으로 함유하지 않는다. 본 발명은 베타 폴리펩티드 이량체 및 사량체를 실질적으로 함유하지 않는 베타 폴리펩티드 단량체의 단리된 집단을 제공한다. 한 실시양태에서, 각 베타 폴리펩티드 이량체의 각 단량체는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고 2.5개 이상의 시알산 기를 갖는다. 본 발명은 베타 폴리펩티드의 단리된 집단을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 CTLA4-Ig 표준물과 비교하여 B7 결합 분석에서 약 70％ 내지 약 130％의 효능을 갖는, 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 상기 분석은 표면 플라즈몬 공명을 측정하는 것을 포함한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드의 단리된 집단을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 표준물과 비교하여 인간 세포 IL-2 억제 분석에서 약 50％ 내지 약 150％의 효능을 갖는, 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드 사량체 또는 고분자량 종의 정제된 집단을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드 단량체는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 집단은 베타 폴리펩티드 이량체를 실질적으로 함유하지 않으며, 임의로 집단은 약 100 그램 초과인 양을 포함한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드 사량체 또는 고분자량 종의 정제된 집단을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드 단량체는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 집단은 베타 폴리펩티드 단량체를 실질적으로 함유하지 않으며, 임의로 집단은 약 100 그램 초과인 양을 포함한다. 한 실시양태에서, 각 사량체 분자는 2쌍의 베타 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 각 폴리펩티드 단량체는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 폴리펩티드 쌍의 각 일원은 다른 일원에 공유적으로 연결되어 있고, 2쌍의 폴리펩티드는 서로 비공유적으로 결합되어 있다. 한 실시양태에서, 각 사량체 분자는 CD80 또는 CD86에 결합될 수 있다. 추가의 실시양태에서, 각 사량체 분자는 베타 폴리펩티드 이량체와 비교하여 2배 이상 더 높은 CD80 또는 CD86에 대한 결합활성을 가지며, 여기서 이량체의 각 폴리펩티드 단량체는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 각 사량체 분자는 서열 2의 서열을 포함하는 CTLA4-Ig 사량체 분자와 비교하여 2배 이상 더 높은 CD80 또는 CD86에 대한 결합활성을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 각 사량체 분자는 베타 폴리펩티드 이량체와 비교하여 2배 이상 더 높은 T 세포 증식 또는 활성화의 억제율을 가지며, 여기서 이량체의 각 폴리펩티드 단량체는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 각 사량체 분자는 서열 2의 서열을 포함하는 CTLA4-Ig 사량체 분자와 비교하여 2배 이상 더 높은 T 세포 증식 또는 활성화의 억제율을 갖는다. 본 발명은 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 조성물은 등전 집중법에 의해 측정된 5.5 이하의 등전점 (pI)을 갖는 등전 집중 겔 상에서 시각화가능한 우세한 이소형을 포함한다. 한 실시양태에서, pI는 뉴라미니다제 처리 후에 증가한다. 한 실시양태에서, 40％ 이상의 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자는 등전 집중법에 의해 측정된 약 5.3 이하의 등전점을 나타낸다. 한 실시양태에서, 70％ 이상의 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자는 등전 집중법에 의해 측정된 약 5.3 이하의 등전점을 나타낸다. 한 실시양태에서, 90％ 이상의 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자는 등전 집중법에 의해 측정된 약 5.3 이하의 등전점을 나타낸다. 본 발명은 약 2.0 ± 0.2 내지 약 5.2 ± 0.2의 pI를 갖는 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자의 단리된 집단을 제공한다. 본 발명은 약 4.5 ± 0.2 내지 약 5.2 ± 0.2의 pI를 갖는 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자의 단리된 집단을 제공한다. 본 발명은 약 4.7 ± 0.2 내지 약 5.1 ± 0.2의 pI를 갖는 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자의 단리된 집단을 제공한다. 본 발명은 (a) 베타 폴리펩티드의 혼합물을 등전 집중 겔 전기영동시키며, 여기서 겔 상의 단일 밴드는 특정 pI를 갖는 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자의 집단을 나타내는 것인 단계, 및 (b) 약 2.0 ± 0.2 내지 약 5.2 ± 0.2의 pI를 갖는 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자의 집단을 단리하여 조성물을 제조하는 단계를 포함하며, 각 폴리펩티드가 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하는, 약 2.0 ± 0.2 내지 약 5.2 ± 0.2의 pI를 갖는 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자를 포함하는 조성물의 제조 방법을 제공한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 폴리펩티드는 약 24 내지 약 28의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 GlcNAc의 평균 몰비를 특징으로 한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 폴리펩티드는 약 2.7 내지 약 3.6의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 GalNAc의 평균 몰비를 특징으로 한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 폴리펩티드는 약 11 내지 약 13의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 갈락토스의 평균 몰비를 특징으로 한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 폴리펩티드는 약 6.4 내지 약 7.0의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 푸코스의 평균 몰비를 특징으로 한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 폴리펩티드는 약 14 내지 약 16의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 만노스의 평균 몰비를 특징으로 한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 폴리펩티드는 약 5.5 내지 약 8.5의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비를 특징으로 한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 분자는 약 5 내지 약 10의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비를 특징으로 한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 폴리펩티드는 (a) 약 24 내지 약 28의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 GlcNAc의 평균 몰비; 및 (b) 약 5.5 내지 약 8.5의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비를 특징으로 한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 분자는 (a) 약 24 내지 약 28의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 GlcNAc의 평균 몰비; (b) 약 2.7 내지 약 3.6의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 GalNAc의 평균 몰비; 및 (c) 약 5.5 내지 약 8.5의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비를 특징으로 한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 분자는 (a) 약 24 내지 약 28의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 GlcNAc의 평균 몰비; (b) 약 2.7 내지 약 3.6의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 GalNAc의 평균 몰비; (c) 약 11 내지 약 13의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 갈락토스의 평균 몰비; 및 (d) 약 5.5 내지 약 8.5의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비를 특징으로 한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 폴리펩티드는 (a) 약 24 내지 약 28의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 GlcNAc의 평균 몰비; (b) 약 2.7 내지 약 3.6의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 GalNAc의 평균 몰비; (c) 약 11 내지 약 13의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 갈락토스의 평균 몰비; (d) 약 6.4 내지 약 7.0의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 푸코스의 평균 몰비; 및 (e) 약 5.5 내지 약 8.5의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비를 특징으로 한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 폴리펩티드는 (a) 약 24 내지 약 28의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 GlcNAc의 평균 몰비; (b) 약 2.7 내지 약 3.6의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 GalNAc의 평균 몰비; (c) 약 11 내지 약 13의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 갈락토스의 평균 몰비; (d) 약 6.4 내지 약 7.0의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 푸코스의 평균 몰비; (e) 약 14 내지 약 16의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 만노스의 평균 몰비; 및 (f) 약 5.5 내지 약 8.5의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비를 특징으로 한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 폴리펩티드는 (a) 약 8 내지 약 17의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 갈락토스의 평균 몰비; (b) 약 5.5 내지 약 8.5의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비; 및 (c) 도 8과 실질적으로 동일한 탄수화물 프로파일을 특징으로 한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 폴리펩티드는 (a) 약 8 내지 약 17의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 갈락토스의 평균 몰비; (b) 약 5.5 내지 약 8.5의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비; (c) 도 8과 실질적으로 동일한 탄수화물 프로파일; 및 (d) 약 5％ 미만의 베타 폴리펩티드 사량체 함량을 특징으로 한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 폴리펩티드는 (a) 약 11 내지 약 13의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 갈락토스의 평균 몰비; 및 (b) 약 5.5 내지 약 8.5의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비를 특징으로 한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 폴리펩티드는 (a) 약 11 내지 약 13의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 갈락토스의 평균 몰비; (b) 약 5.5 내지 약 8.5의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비; 및 (c) 약 5％ 미만의 베타 폴리펩티드 사량체 함량을 특징으로 한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 폴리펩티드는 (a) 약 5.5 내지 약 8.5의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비; 및 (b) 도 8과 실질적으로 동일한 탄수화물 프로파일을 특징으로 한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 폴리펩티드는 (a) 약 11 내지 약 13의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 갈락토스의 평균 몰비; 및 (b) 도 8과 실질적으로 동일한 탄수화물 프로파일을 특징으로 한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 폴리펩티드는 (a) 약 5.5 내지 약 8.5의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비; 및 (b) 약 5％ 미만의 베타 폴리펩티드 사량체 또는 고분자량 종 함량을 특징으로 한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 폴리펩티드는 (a) 약 11 내지 약 13의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 갈락토스의 평균 몰비; 및 (b) 약 5％ 미만의 베타 폴리펩티드 사량체 또는 고분자량 종 함량을 특징으로 한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 폴리펩티드는 도 8과 실질적으로 동일한 탄수화물 프로파일을 나타낸다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 폴리펩티드는 도메인 I - IV의 탄수화물 프로파일을 나타내고, 도메인 I은 아시알릴화 올리고사카라이드를 나타내는 피크를 포함하고, 도메인 II는 모노-시알릴화 올리고사카라이드를 나타내는 피크를 포함하고, 도메인 III은 디-시알릴화 올리고사카라이드를 나타내는 피크를 포함하고, 도메인 IV는 트리-시알릴화 올리고사카라이드를 나타내는 피크를 포함한다. 한 실시양태에서, 도메인 I에서의 제1 피크 및 도메인 II에서의 주 피크 간의 N-연결된 올리고사카라이드의 체류 시간에서의 차이는 약 11 내지 약 13분이다. 한 실시양태에서, 도메인 III 및 IV의 합은 전체 탄수화물 프로파일의 약 25％ 내지 약 36％를 차지한다. 본 발명은 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드 단량체는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 약 0.5％ 이상의 분자는 시스테이닐화되어 있다. 본 발명은 베타 폴리펩티드의 단리된 집단을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 집단은 도 11에 도시된 바와 같은 질량 분석 프로파일을 나타낸다. 본 발명은 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자의 단리된 집단을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 약 5.5 내지 약 8.5의 시알산 기 대 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 평균 몰비를 갖는, 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자는 생산 세포주의 세포로부터 생산된다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 폴리펩티드는 서열 4의 위치 102에서의 아스파라긴 아미노산 잔기, 서열 4의 위치 134에서의 아스파라긴 아미노산 잔기, 서열 4의 위치 233에서의 아스파라긴 아미노산 잔기에서 글리코실화되어 있다. 본 발명은 베타 폴리펩티드를 포함하는 단리된 조성물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 분자는 (a) 약 24 내지 약 28의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 GlcNAc의 평균 몰비; (b) 약 2.7 내지 약 3.6의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 GalNAc의 평균 몰비; (c) 약 11 내지 약 13의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 갈락토스의 평균 몰비; (d) 약 6.4 내지 약 7.0의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 푸코스의 평균 몰비; (e) 약 14 내지 약 16의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 만노스의 평균 몰비; (f) 약 5.5 내지 약 8.5의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비; (g) 약 2.4 ± 0.2 내지 약 5.2 ± 0.2 범위의 등전 집중 겔 상에서의 시각화로부터 측정된 pI; (h) 5 ppm 이하의 MCP-1; (i) 5％ 미만의 사량체 또는 고분자량 종; (j) 1％ 미만의 베타 폴리펩티드 단량체; 및 (k) 서열 4, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16 중 어느 것과 95％ 이상 동일한 아미노산을 갖는 집단의 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자를 특징으로 하고, 집단 내의 베타 폴리펩티드는 CD80 및 CD86에 결합할 수 있다. 본 발명은 베타 폴리펩티드 또는 그의 제약 등가물의 단리된 집단을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하고, 분자의 집단은 (a) 약 24 내지 약 28의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 GlcNAc의 평균 몰비; (b) 약 2.7 내지 약 3.6의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 GalNAc의 평균 몰비; (c) 약 11 내지 약 13의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 갈락토스의 평균 몰비; (d) 약 6.4 내지 약 7.0의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 푸코스의 평균 몰비; (e) 약 14 내지 약 16의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 만노스의 평균 몰비; (f) 약 5.5 내지 약 8.5의 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 시알산의 평균 몰비; (g) 약 2.4 ± 0.2 내지 약 5.2 ± 0.2 범위의 등전 집중 겔 상에서의 시각화로부터 측정된 pI; (h) 5 ppm 이하의 MCP-1; (i) 5％ 미만의 베타 폴리펩티드 사량체 또는 고분자량 종; (j) 1％ 미만의 단량체; 및 (k) 서열 4, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16 중 어느 것과 95％ 이상 동일한 아미노산을 갖는 집단의 베타 폴리펩티드를 특징으로 하고, 집단 내의 베타 폴리펩티드 분자는 CD80 및 CD86에 결합할 수 있다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 2005년 12월 20일에 출원된 미국 특허 출원 제60/752,150호에 기재된 바와 같은 부형제를 포함하는 조성물을 제공한다. 한 실시양태에서, 조성물은 베타 폴리펩티드 분자를 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 제약상 허용되는 희석제, 보조제 또는 담체를 더 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 수크로스, 제일인산나트륨 일수화물, 염화나트륨, 수산화나트륨, 염산 및 멸균수를 더 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 수크로스, 폴록사머, 제일인산나트륨 일수화물, 무수 제이인산나트륨, 염화나트륨, 수산화나트륨 및 멸균수를 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 동결건조된다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드, 수크로스, 제일인산나트륨 일수화물, 염화나트륨, 수산화나트륨 및 염산을 포함하는 동결건조된 조성물을 제공한다. 제제 및 키트: 본 발명은 95％ 이상의 베타 폴리펩티드 이량체 및 5％ 이하의 베타 폴리펩티드 사량체 (고분자량 종)를 포함하는, 동결건조된 베타 폴리펩티드 혼합물을 제공하며, 여기서 각 폴리펩티드는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 혼합물은 98％ 이상의 베타 폴리펩티드 이량체 및 2％ 이하의 베타 폴리펩티드 사량체 (고분자량 종)를 포함한다. 한 실시양태에서, 혼합물은 99％ 이상의 베타 폴리펩티드 이량체 및 1％ 이하의 베타 폴리펩티드 사량체 (고분자량 종)를 포함한다. 한 실시양태에서, 혼합물은 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 5 몰 이상의 시알산을 포함한다. 한 실시양태에서, 혼합물은 베타 폴리펩티드 이량체 (고분자량 종)의 몰 당 약 24 내지 약 28 몰의 GlcNAc를 포함한다. 한 실시양태에서, 혼합물은 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 약 2.7 내지 약 3.6 몰의 GalNAc를 포함한다. 한 실시양태에서, 혼합물은 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 약 11 내지 약 13 몰의 갈락토스를 포함한다. 한 실시양태에서, 혼합물은 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 약 6.4 내지 약 7.0 몰의 푸코스를 포함한다. 한 실시양태에서, 혼합물은 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 몰 당 약 14 내지 약 16 몰의 만노스를 포함한다. 본 발명은 또한 (a) 본 발명의 동결건조된 베타 폴리펩티드 혼합물을 함유하는 용기; 및 (b) 동결건조된 베타 폴리펩티드 혼합물의 주사용액으로의 재구성에 관한 지침서를 포함하는 제약 키트를 제공한다. 예시적 치료 방법: 본 발명은 T 세포를 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, T 세포 증식, 활성화 또는 둘 다의 억제 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 면역 반응의 억제가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 면역 반응의 억제 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 면역 장애의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 면역 장애의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 항원에 대한 면역 관용의 유도가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 항원에 대한 면역 관용의 유도 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 염증의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 염증의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 류마티스양 관절염의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 류마티스양 관절염의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 건선의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 건선의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 루푸스의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 루푸스의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 알레르기의 치료 또는 예방이 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 알레르기의 치료 또는 예방 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 이식편 대 숙주 질환의 치료 또는 예방이 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 이식편 대 숙주 질환의 치료 또는 예방 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 이식된 기관의 거부반응의 치료 또는 예방이 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 이식된 기관의 거부반응의 치료 또는 예방 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 이식된 조직의 거부반응의 치료 또는 예방이 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 이식된 조직의 거부반응의 치료 또는 예방 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 이식된 세포의 거부반응의 치료 또는 예방이 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 이식된 세포의 거부반응의 치료 또는 예방 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 이식된 세포는 골수 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 이식된 세포는 도세포(islet cell)이다. 또 다른 실시양태에서, 이식된 세포는 인슐린-생산 췌장 도세포이다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 다발성 경화증의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 다발성 경화증의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 크론병의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 크론병의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 제I형 당뇨병의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 제I형 당뇨병의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 염증성 장 질환의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 염증성 장 질환의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 난소염의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 난소염의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 사구체신염의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 사구체신염의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 알레르기성 뇌척수염의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 알레르기성 뇌척수염의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 중증 근무력증의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 중증 근무력증의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 각 폴리펩티드가 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하는 것이고, 약 5 내지 약 10의 시알산 기 대 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 평균 몰비를 갖는, 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자의 집단의 면역 장애의 치유적 및/또는 예방적 치료를 위한 의약에 제조에 있어서의 용도를 제공한다. 본 발명은 각 폴리펩티드가 서열 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16의 서열을 포함하는 것이고, 약 5 내지 약 10의 시알산 기 대 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 평균 몰비를 갖는, 베타 폴리펩티드 또는 베타 폴리펩티드 분자의 집단의 류마티스양 관절염의 치료에서의 사용에 관한 지침서를 포함한 포장물로의 항-류마티스양 관절염 약제의 제조에 있어서의 용도를 제공한다. 한 실시양태에서, 집단은 약 5.5 내지 약 8.5의 시알산 기 대 베타 폴리펩티드 이량체 또는 베타 폴리펩티드 분자의 평균 몰비를 갖는다. 예시적 조합 요법: 본 발명은 T 세포를 메토트렉세이트와 조합한 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, T 세포 증식, 활성화 또는 둘 다의 억제 방법을 제공한다. 본 발명은 메토트렉세이트와 조합한 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 면역 반응의 억제가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 면역 반응의 억제 방법을 제공한다. 본 발명은 메토트렉세이트와 조합한 유효량의 본 발명의 베타 폴리펩티드 조성물을 항원에 대한 면역 관용의 유도가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 항원에 대한 면역 관용의 유도 방법을 제공한다.