동물 세포의 무혈청 배양에 사용하기 위한 배양 배지 첨가물, 키트 및 이의 용도 document_id A220623065818

중간엽 줄기세포(mesenchymal stem cell)은 체세포줄기세포(somatic stem cell)의 하나이며, 골수 등에 존재한다. 중간엽 줄기세포는 지방 세포, 골 세포, 연골 세포 등으로 분화될 수 있는 다분화능(pluripotency)을 가지며 자가 재생능을 가지는 줄기 세포로 알려져 있다. 현재, 중간엽 줄기세포는 재생 의료 분야에서 이식을 위한 세포로 사용되고 있다. 중간엽 줄기세포는 골 손상(bone defect), 연골 손상(cartilage defect), 치주 질환 (periodontal disease), 심근경색(myocardial infarction), 난치성 피부 질환(refractory cutaneous disease), 골다공증(osteoporosis), 변형성 관절증(osteoarthrosis), 척수 손상(spinal cord injury), 조혈 지지체(hematopoietic support), 및 기관 이식에서의 거부 억제(antirejection)와 같은 다양한 질환에 적용된다. 중간엽 줄기세포는 장래에 더욱더 다양한 질환에 적용될 것으로 기대된다 (예를 들면 뇌경색(cerebral infarction), 폐쇄성 동맥경화증 (arteroisclerosis obliterans), 신장 장애(kidney disorder) 등). 중간엽 줄기세포는 골수, 골막(periostea) 등에 존재한다. 이러한 조직에서 수득한 중간엽 줄기세포는 증식하며 의도한 세포로 더 분화되므로, 조직 재생용 의료 용도로 사용될 수 있는 조직으로 제조된다. 그러나 살아있는 조직에 존재하는 중간엽 줄기세포의 수는 매우 적기 때문에, 이식을 위한 중간엽 줄기세포를 이식 용도로 사용하기 위해서는 조직으로부터 수득한 세포를 충분한 증식시킬 것이 요구된다. 일반적으로, 동물 세포는 우태 혈청(fatal bovine serum) 등과 같은 5 내지 20% 비인간 동물-유래 혈청에 배양 배지를 사용하여 배양한다. 혈청은 시험관 내(in vitro) 세포 성장 및/또는 증식을 촉진하기 위한 영양원, 또는 호르몬 등과 같은 생물학적 활성 물질의 공급원(resource)으로 사용된다. 그러나 혈청은 경제적으로 부담이 매우 크며, 또한 자연 생성물이기 때문에 혈청의 구성 성분은 혈청마다 매우 다르다. 더욱이, 배양된 세포로부터 혈청-유래 단백질 등을 제거함으로써 배양된 세포를 정제해야만 하므로, 복잡합 과정을 야기한다. 더 나아가 배양된 세포가 (바이러스, 병원성 프라이온 등) 알려지지 않은 병원체에 감염될 위험이 있다. 한편, 비인간 동물-유래 혈청을 사용하지 않고 동물세포를 배양하기 위한 기술이 발전되어 왔다. 예를 들어, (환자로부터 수득한 세포를 배양하고 배양된 세포를 환자에게 이식하는) 자가 이식 치료를 위한 세포의 배양은 동일 환자로부터 수득된 자가 인간 혈청을 사용한다. 이러한 방법으로 배양된 세포의 오염을 피할 수 있다. 그러나 혈청을 생산하기 위하여 많은 양의 혈액이 요구되며, 이는 환자에게 큰 부담이 된다. 이러한 문제를 피하기 위하여, 혈청이 포함되지 않은(무혈청 배양 배지) 배양 배지 또는 혈청 성분을 적게 포함하고 있는 배양 배지 (저-혈청 배양 배지)가 발달하여 왔다. 배양 배지 내에 혈청이 저농도로 포함된 경우 세포의 증식 능력이 현저하게 감소하거나 세포가 사멸한다. 이러한 이유로, 증식능을 잃지 않고 세포를 배양할 수 있는 배양 배지를 생산하기 위하여, 배양 배지 내에 혈청을 대신할 수 있는 세포 성장 인자를 첨가하라 필요가 있다. 일반적으로, 펩타이드 호르몬, 성장 인자 등과 같은 다양한 물질이 혈청을 대체할 세포 성장 인자로서 사용되고 있다(예, 특허 문헌 1 및 2 참조). 예를 들면, 그러한 무혈청 배양 배지로서 기저배지로 HAM''s 12 배양 배지를 사용하는 무혈청 배양 배지 및 인슐린, 트랜스페린등이 첨가된 무혈청 배양 배지가 알려져 있다. 또한, 의학적 치료에 사용하기 위한 연골세포를 성장 인자 및 지방산이 첨가된 무혈청 배양 배지에 배양시키는 방법이 알려져 있다 (예, 특허문헌 3 및 4 참조). 나아가 특허 문헌 5는 신경 줄기 세포를 장기간 배양하기 위한 방법 및 조성물에 대하여 개시하고 있다. [특허 문헌 1] 일본 미심사 특허 공개 공보, Tokukaihei, No.8-308561 (1996년11월26일 공개) [특허 문헌 2] 일본 미심사 특허 공개 공보, Tokukaihei, No.9-191874 (1997년07월29일 공개) [특허 문헌 3] PCT 국제출원 일본어 번역문, Tokuhyo, No.2005-515777 (2005년06월02일 공개) [특허 문헌 4] PCT 국제출원 일본어 번역문, Tokuhyo, No.2002-529071 (2002년09월10일 공개) [특허 문헌 5] PCT 국제출원 일본어 번역문, Tokuhyo, No.2003-516141 (2003년05월13일 공개)