LG AdvanSure TB/NTM Real-Time PCR Kit의 항산균 진단 수행 능력 평가 document_id A220623243490

AdvanSure TB NTM real-time PCR kit 는 결핵균과 비결핵 미코박테리아를 검출하기 위해 결핵균과 NTM에 특이적인 IS6110과 rpoB 유전자를 표적으로 하는 primer와 TaqMan probe를 사용하여 국내에서 새로 개발된 검출 키트이다. 본 연구에서는 항산균 도말 염색과 배양법, COBAS Amplicor MTB PCR, AdvanSure의 결과를 비교하여 AdvanSure의 임상적 유용성을 평가하고자 하였다. 항산균 도말 염색과 배양법, Amplicor가 의뢰된 총 165명의 환자들에서 채취한 182개의 검체를 대상으로 SLAN real time PCR detection system으로 AdvanSure 검사를 하였다. AdvanSure의 예민도와 특이도를 AFB 염색과 배양을 기준으로 분석하였다. 총 182개의 검체 중 AdvanSure와 항산균 배양에 의해 43개의 검체에서 결핵균을 검출하였고, NTM은 12개의 검체에서 검출하였다. 항상균 배양 결과를 기준으로 했을 때 AdvanSure의 결핵균 검출 예민도와 특이도는 97.3% 와 95.5% 였고, NTM의 검출 예민도와 특이도는 75.0% 와 100% 였다. AdvanSure는 우수한 예민도와 특이도로 임상검사실에서 결핵균과 NTM을 검출하는 데 유용하게 사용될 수 있을 것으로 판단된다. AdvanSure는 M tuberculosis complex에 특이적인 IS6110과 항산균의 rpoB 유전자 부위의 염기서열에 특이적인 시발체에 의해 반응 산물이 형성되는 동시에 각 유전자에 특이적인 Taqman probe가 분해되어 형성되는 형광을 실시간중합효소연쇄반응 장비로 측정하는 방법으로, 결핵균과 여러 종류의 NTM을 검출할 수 있는 국내에서 개발된 진단 키트이다. 본 연구 결과, 항산균 배양 결과를 기준으로 했을 때 AdvanSure의 결핵균 검출 예민도와 특이도는 97.3%와 95.5%로서 기존에 보고된 여러 결핵균 검출 방법의 민감도 66.7 100.0%와 특이도 86.8 100%에 비교해 볼 때 뒤지지 않는 결과라고 판단된다. AdvanSure의 NTM 검출 예민도와 특이도는 75.0%와 100%로서 예민도는 결핵균보다 낮았으나 이전의 AdvanSure 평가 연구의 55.6%에 비해서 높았다. 항산균 도말 염색 음성인 검체에서 분자생물학적 방법에 의한 항산균의 검출은 신속한 진단과 치료를 가능하게 하며 불필요하거나 해로운 진단 시술을 막는 데 도움이 되므로 검출 예민도가 특히 중요하다. 본 연구에서는 항산균 배양 양성이면서 도말 음성일 때 AdvanSure의 결핵균과 NTM의 검출 예민도는 각각 93.0%와 72.7%로 기존의 결핵균 74.5%, NTM 50%의 예민도에 비해 더 높았다. 본 연구의 제한점으로 NTM 양성 검체 수가 12건으로 적어 AdvanSure의 NTM 검출 능력의 정확한 평가가 어려웠으며, 향후 이에 대한 추가 연구가 필요할 것으로 생각되었다. 본 연구에서 항산균 배양 결과를 기준으로 할 때 AdvanSure의 결핵균 검출 위양성률과 위음성률은 4.5%와 2.7%로서 증폭 산물의 오염에 의한 위양성과 증폭 억제 물질에 의한 위음성은 해결해야 할 문제점이었다. 항산균 PCR 검사의 위양성은 잔효 효과나 교차 오염에 의해 발생할 수 있으며, 또한 역학적으로 결핵의 유병률이 높은 지역에서 활동성 결핵이 없는 환자의 검체에서 적은 수의 결핵균이 군체를 형성하여 PCR에 의해 검출될 수 있다고 한다. 본 연구에 사용된 키트는 실시간 중합효소연쇄반응법을 이용하기 때문에 증폭 후 전기영동이나 교잡반응과 같은 추가 과정 없이 분석이 가능하므로 핵산 추출 과정에서 검체 오염에 주의한다면 교차 오염에 의한 위양성의 가능성은 낮다고 할 수 있다. 본 연구에서는 위양성을 보인 모든 예에서 CT 값이 31 이상이었다. 따라서 결과치가 판정기준치에 가까운 값일 경우 위양성의 가능성을 생각하여 임상 정보를 고려한 후 결과를 신중히 해석해야 할 것이다. 또한, 위음성 결과를 보이는 경우는 기술적 오류, 균주 수가 적을 때, 결핵균이 응집하거나 끈을 형성하는 성향에 의해 분포가 균일하지 않을 때, 검체에 증폭과정 저해 인자가 존재할 때, 증폭하는 표적 유전자의 변이나 결핍이 있을 때 등 여러 요인에 의해 나타날 수 있다. PCR에서 위음성을 보이는 주요 원인인 검체 내 핵산증폭을 저해하는 물질의 존재는 배양된 균보다 임상 검체를 이용한 검사에서 그 가능성이 훨씬 높으며, 문헌에 의하면 저해 비율은 0.3 4.7% 정도로 다양하게 보고되고 있다. 분자생물학적인 방법에서는 저해 반응을 확인하기 위해 internal control을 이용하여 위음성의 가능성을 확인하며, 본 연구에서 사용된 키트도 internal control 시발체를 함유하고 있는데, 추가적인 정제나 재추출 후 재검한 결과, 핵산증폭과정의 저해는 발견되지 않아서, 이에 의한 위음성의 가능성은 거의 없을 것으로 생각된다. 분자생물학적인 방법은 이러한 위양성이나 위음성의 문제가 존재하기 때문에 항산균 염색과 배양을 함께 사용해야 하며 그 결과는 임상 정보를 고려해서 해석해야 한다. 본 연구 결과 AdvanSure은 항상균 검출의 민감도와 특이도가 우수하여 호흡기 및 비호흡기 검체를 이용한 결핵 및 비결핵 미코박테리아 감염증의 신속한 진단에 유용하게 사용될 수 있을 것으로 생각되었다.